化学实验操作色谱实验HPLC测定化妆品中性激素的含量.ppt

HPLC测定化妆品中性激素的含量 一、实验目的 1．掌握用HPLC法测定化妆品中性激素的含量的原理和方法 2．掌握供试品溶液、对照品溶液的制备方法 3．熟悉高效液相色谱仪的构造及使用方法 二、实训原理 以有机溶剂提取化妆品中的性激素，用高效液相色谱法仪进行分析，以保留时间定性，峰面积定量（外标法）。 HPLC法测定含量可消除共存杂质和辅料的干扰，具有专属性高的特点。性激素在紫外光区（254nm)有特征吸收，可以用紫外检测器进行检测。 二、实训原理 定性：保留时间tR 定量：峰面积（A）或峰高 色谱图: 三、质量标准 色谱条件： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；以甲醇-水（80:20）为流动相；流速0.6ml/min，检测波长为254 nm。理论塔板数按雌酮峰计算应不低于2000。 化妆品不得添加雌三醇等7种性激素。 四、实训步骤 （1）操作前的准备（2-3人/组） ①对照品的制备：甲醇溶解，得到含雌酮、甲基睾丸酮和黄体酮的对照品溶液。（教师配制） （ C雌酮标 = 1000.0ug/ml，C甲基睾丸酮标 = 30.0ug/ml，C黄体酮标 = 30.0ug/ml） ② 供试品溶液的制备：精密称取样品5.0g→10ml量瓶中 → 色谱甲醇稀释到10ml → 混匀 → 经0.45μm有机过滤头过滤（注射器润洗一次，EP管润洗3次） → 续滤液装入EP管1ml→ 10-503 测定→根据峰面积计算待测溶液中激素的质量浓度。 四、实训步骤 ③流动相的制备：甲醇-水（80:20）充分混合均匀，即得，制备好的流动相应通过适宜的0.45 μm 滤膜滤过，用前超声脱气。 ④进样。记录对照品和样品的tR和A 按外标法以A计算，即得。 五、结果计算 六、结果判定 按规定要求进行数据处理。 结果判断:本品不得含有雌三醇等7种性激素。 * * 2015年5月 仪器分析教研室 供试品的主峰的保留时间应与对照品的主峰的保留时间一致。 可采用内标法、外标法等。 1.雌酮：6.098 min 2.甲基睾丸酮：7.085 min 3.黄体酮：9.482 min 1 2 3 对照品： 样品： w：激素类物质的质量分数（ % ） C：试样中各类激素类物质的浓度（ug/ml） V：试样溶液定容体积（ ml ） m：试样称取的质量（g） *