深入实验动物组织核酸提取与鉴定.pptVIP

实验仪器 电子天平 匀浆器 电炉 离心机 紫外分光光度计 （一）DNA的提取 取新鲜猪肝组织3 g，加入0.14 mol/L NaCl，0.015 mol/L柠檬酸纳溶液6 mL，在乳钵中加入少量石英砂仔细研磨成匀浆，或用组织匀浆器匀浆30 s； 将匀浆倒入离心管，4000 rpm，15 min，弃上清； 沉淀中加入15 mL 1mol/L NaCl，混匀，搅拌数分钟， 4000 rpm，15 min，弃沉淀； 上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V），剧烈振摇10 min， 4000 rpm，10 min； 取上层，转移至另一离心管，加入等体积95%乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕取出沉淀，或4000 rpm，10 min，离心取沉淀（DNA粗品），用1 mL蒸馏水稀释溶解DNA。 实验步骤 （二）DNA的鉴定 取部分DNA溶液加入试管，加4 mL5%（m/V）H2SO4，再用带有长玻璃管的软木塞塞紧管口，在沸水浴中加入15 min，静置数分钟水解DNA，取上清进行鉴定分析； 取DNA水解液1 mL，加二苯胺试剂2 mL，摇匀于沸水浴中加热10 min，观察颜色变化； 取0.5 m