科研实验二马立克氏病琼脂扩散实验.pptVIP

1%琼脂粉; 鸡群马立克氏病感染情况的监测通常采用琼脂扩散试验， 检测对象包括：血清中马立克氏病病毒特异抗体或感染鸡羽髓 中马立克氏病病毒抗原。其操作方法如下： 1．琼脂糖平板制备 用0.01M pH7.4的PBS配制1％琼脂糖溶 液，水浴加温充分溶化后，加入培养皿，制成厚度约2～3mm厚 的琼脂糖凝胶板；置于室温下冷却凝固后，用7孔（梅花孔）打 孔器准确打孔，加热封底。;2．检测血清抗体时，中央孔内滴加马立克氏病病毒标准琼扩抗原，周边孔滴加待检血清，但至少一孔加阳性血清，抗原和血清的加入量以加满而不溢出为度。样品加毕后，将琼脂平皿加盖后平放于加盖的湿盒内，37℃温箱中孵育8～24h，观察并记录结果。测定抗体效价时可倍比稀释血清，以出现沉淀带的血清最大稀释度为抗体效价。;3．检测抗原时，中央孔加马立克氏病标准阳性血清，周边1、4孔加马立克氏病标准琼扩抗原，周边2、3、5、6孔加待检羽髓浸液，即在试管内加入1～2滴PBS然后将羽髓在其中挤压而成。加样后将琼脂平皿置湿盒内，于37℃温箱孵育，8～24h内观察结果。; 1、切勿剧烈振荡融化后的琼脂糖，防止气泡的出现。 2、反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解离而导致假 阴性、不出现或不清楚。 3、加样时，注意不要产生气泡，以加满为度。 4、每加完不同的样后要更换枪头，以免造成污染。 ;实验步骤; 当被检样品