【微生物学】第二次实验课：碱性磷酸酶米氏常数的测定，血清转氨酶活性测定（2016-03-10）.pdfVIP

实验二 （1） 碱性磷酸酶米氏常数的测定 生化课程组 一、目的要求 1.学习分光光度法测定的原理和方法 (Spectrophotometry, SP) 2.学习和掌握米氏常数 （Km ）及最大反应速度 （Vm ）的测定的原理和方法，测出碱性磷酸 酶在以对硝基酚磷酸为底物时的K 和V 值。 m m 二、原理 （一）分光光度法的基本原理及方法 1. 物质的颜色和波长： 可见光：波长 （λ）400—760nm 紫外光：λ小于400nm 红外光：λ大于760nm 2. 溶液的颜色和光吸收的关系： 光的互补示意图 溶液的颜色，是由于不同的有色物质有选择地吸收某种颜 色的光而引起的。溶液呈现的颜色是与它主要吸收的光相 互补的光的颜色。溶液吸收的光越多，呈现的颜色越深。 能