化妆品原料和生产环境中污染菌的检验.docxVIP

第一节化妆品原料的微生物检验 化妆品原料种类很多，性能各异,根据其性能和用途，大体上可分为基质原料和 添加剂（辅助原料。基质原料是组成化妆品的主体或在该化妆品内起主要功能的物 质，主要包括 油脂、蜡类、粉类、胶质类、表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂等。添 加剂是赋予色、香及其 他特定作用的物质，大多为天然的含有营养成分或生物活性 的物质,这些成分又是微生物生 长繁殖的良好营养源，在一定程度上成为微生物的 培养基, 因此，检验原料中的微生物很重 要。 一、 指标菌及特定菌的选择 一般原料的微生物指标菌同化妆品成品即：菌落总数、粪大肠菌群、绿脓杆 菌、金黄色 葡萄球菌、霉菌和酵母菌。粉类原料大多数是由土壤矿物质加工而成 而土壤受微生物污染 严重。据资料报道，土壤中的致病菌有需氧的炭疽杆菌和厌氧 的破伤风杆菌、产气荚膜杆菌 等,其检出率很高，产气荚膜杆菌几乎达100%,恶性水 肿杆菌64%,破伤风杆菌29%肉毒杆菌6%。这些致病菌能在土壤中生存较长时间, 例如炭疽杆菌的芽抱能生存15年之久;肠道致病菌可生存100~170d结核杆菌能生 存1年左右;破伤风杆菌芽抱和产气荚膜杆菌 也能长期在土壤中生存。在滑石粉、 高岭土、碳酸钙等粉类原料中，经常检出枯草杆菌、真 菌等,因此，在粉类原料中可 增加需氧芽抱杆菌、产气荚膜杆菌和破伤风杆菌指标。在某些生物性原料如动物 内脏及其提取物等可增加沙门氏菌指标。 二、 样品的预处理 根据原料性质的不同，选用相应的预处理方法，如油质类原料可按油性或疏水性 （油包水化妆品处理，粉类原料按粉剂化妆品样品处理等。 三、 检验方法 各种微生物的检验方法均与化妆品成品检验方法相同 ，可参见《化妆品卫生规 范》中微生物检验方法。原料与成品微生物检验方法最根本的不同点是检验原料 所用的稀释液和培养基中都不含有中和剂（卵磷脂和吐温-80。如检验菌落总数用 普通营养琼脂培养基，绿脓杆菌增菌培养液可用普通肉汤，金黄色葡萄球菌增菌培养 液用含7.5%氯化钠肉汤，稀释液均 用生理盐水。 四、培养基 (1营养琼脂 成分： 蛋白胨20g 琼脂15~20g 牛肉膏5g 氯化钠5g 蒸馏水1000mL 制法:将上述成分混合后，加热溶解，调PH值为7.4~7.6,12TC、20min高压灭菌, 储存于冷暗处备用。 (2 7.5%氯化钠肉汤 成分： 肉汤100mL 氯化钠7.5g 制法:将上述两种成分混合均匀，分装，115C、20min高压灭菌。 第二节化妆品生产用水的微生物检验方法 水在化妆品的生产中用量极大，是化妆品的主要成分之一，水的品质对化妆品的 质量有着重大影响。化妆品生产用水的处理一般采用过滤吸附法、电渗析法、 离 子交换法等，对生产用水的微生物检测指标有菌落总数、粪大肠菌群、霉菌和酵母 菌、金黄色葡萄球菌、 绿脓 杆菌。 一、 菌落总数 菌落总数是指水样在一定条件下（营养琼脂培养基,37C ,24h需氧培养后1mL 水样中所含菌落数。检验方法介绍如下。 （1以无菌操作灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，加到灭菌的平皿内，注入约 15mL已融化并冷却到45C左右的营养琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培养 充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基 作为空白对照。（2待冷却凝固后，翻转平皿,使其底面朝上，置于（36 ± C培养箱内培 养24h,进行菌落计数，即为1mL水样中的菌落总数,以（CFU/mL报告结果。 二、 粪大肠菌群 粪大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出的，是指一群在44.5C培养24h能发酵 乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌。 粪大肠菌群数的高低 表明了粪便污染 程度,也反映了对人体健康潜在危害性的大小，是评价化妆品生产 用水卫生质量的重要指标之一。因生产用水的洁净度较高，可采用滤膜法检测，即 将水样通过孔径为0.45卩m勺滤膜过滤,细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在MFC培养基 上,445C培养后，计数典型菌落。MFC培 养基 成分： 胰胨10g 胆盐3号（Bile salt No.3或混合胆盐1.5g 多胨5g 酵母浸膏3g 琼脂15g 氯化钠5g 苯胺蓝0.2g 乳糖12.5g 蒸馏水1000mL 配制方法： 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸（10g/L的氢氧化钠溶液 [c（NaOH=0.2mol/L]10mL,混匀后,取500mL加入琼脂煮沸溶解,于另外500mL蒸馏 水中，加入除苯胺蓝以外的其他试 剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀调节PH 值为7.4,加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60°C左右,制成平板,不可高压 灭菌。制好的培养基应存放于 2~10C环境下，不超过96h。 匚c严并甘 EC培养基 成分： 胰蛋白胨20g 磷酸氢二钾4g 乳糖5g 磷酸二