生物产品分析与检验技术乳酸的测定乳酸的分析与检验.pptx

《生物产品的分析与检验》;1．乳酸的化学结构 2．乳酸的性质 3．乳酸的用途 3．乳酸的测定方法（实训案例） 以啤酒中乳酸含量的测定为实训案例，介绍酸碱滴定法和对羟基联苯比色法测定乳酸含量的方法。;一、乳酸的性质与结构;酸碱滴定法 对羟基联苯比色法测定啤酒中乳酸含量;酸碱滴定法测定乳酸含量; 将试样加入过量的NaOH标准溶液，加热后使乳酸和乳酸干酐与碱反应完全，冷却后以酚酞作指示剂，用强酸标准溶液滴定过量的碱。根据消耗的强酸标准溶液体积，可以求出乳酸的含量。;溶液的配制 （1）1mol/L氢氧化钠标准滴定液的配制与标定 （2）1mol/L硫酸标准溶液的配制与标定 （3）1%酚酞指示剂的配制 （4） 溴甲酚绿混合指示液;2.试样中乳酸含量的测定 称取试样1.5g(称准至0.0002g)于150mL的三角瓶中，加50ml新煮沸的冷蒸馏水，加40mL 1mol/L氢氧化钠标准溶液，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸标液（1mol/L）滴定，酚酞指示液变红时停止滴定，记录消耗硫酸标液的体积数（mL），每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于90.08mg乳酸（C3H6O3）。用空白试验校正。;（1）乳酸含量测定结果数据记录如下表;（2）乳酸含量测定结果计算公式：;对羟基联苯比色法测定乳酸含量; 在除去蛋白质，葡萄糖等干扰物质的啤酒中，乳酸在铜离子的催化下，与浓硫酸作用生成乙醛，乙醛能与对羟基联苯作用生成在565nm处有特征吸收的紫红色物质，在一定范围内，乳酸浓度与波长为565nm的吸光度呈线性关系，因此可以通过测定565nm处的吸光度来测定乳酸的含量。;1.试剂 无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、40%乙醛溶液、无水葡萄糖、蔗糖均为分析纯试剂。 2.主要溶液 （1）钨酸溶液 （2）20%硫酸铜溶液 （3）4%(W/V)硫酸铜溶 （4）对羟基联苯溶液 （5）乳酸标准储存液(1mg/mL) （6）乳酸标准应用液(200μg/mL) （7）醛溶液(50μg/mL);1. 样品处理: 　取约3mL左右啤酒酒液，3000r/min离心5min，吸取上清液稀释一定倍数后，吸取稀释液2.00mL于洁净离心管中，准确加入2.00mL钨酸溶液，混匀，室温静置至溶液有明显絮状物出现(约30 ~ 45min)，10000 r/min离心10min，取上清液加入0.3g活性炭，反复摇后置室温30min，过滤，滤液收集于5mL具塞试管中，60℃水浴保温0.5h，冷却待用。;用200μg/ mL乳酸标准使用液 同样品溶液（酒液）预处理后(可以不稀释)，按下表1数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。;取酒液滤液按标准曲线的测定方法，以蒸馏水为空白测定其在560nm处的光吸收，所得数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量，即为酒液中的乳酸含量。 酒液乳酸含量=标准曲线上查得相应的乳酸含量×稀释倍数;设计记录表格并将测定结果准确记录 乳酸含量按下式计算： 酒液乳酸含量=标准曲线上查得相应的乳酸含量×稀释倍数