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20XX ? Knowledge Points 常识点汇编 第一章 基因工程 第一节 基因工程概述 一．基因工程的概念 操作环境 操作方针 操作水平 根本进程 成果 生物体外 基因 分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需求的基因产品 因为基因工程是在DNA分子水平上进行操作,因此又叫做重组DNA技能。 二．基因工程的根本东西 （一）“分子手术刀”——约束性核酸内切酶（简称约束酶） 1．来历：首要是从原核生物中别离纯化出来的。 2．功用：可以辨认双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，而且使每一条链中特定部位的两 个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 3．成果：经约束酶切开产生的DNA片段结尾一般有两种方式：黏性结尾和平结尾。 （二）“分子针线”——DNA衔接酶 1．分类：根据酶的来历不同，可分为E·coliDNA衔接酶和T4DNA衔接酶两类 2．功用：康复被约束酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ★两种DNA衔接酶(E·coliDNA衔接酶和T4DNA衔接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②差异：E．coIiDNA衔接酶来历于大肠杆菌，只能使黏性结尾之间衔接； T4DNA衔接酶能缝合两种结尾，但衔接平结尾之间的功率较低。 ★DNA衔接酶与DNA聚合酶效果的比较 DNA衔接酶 DNA聚合酶 不同点 衔接的DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 衔接的方针 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 效果实质 构成磷酸二酯键 化学实质 蛋白质 (三) “分子运送车”——载体 1.载体具有的条件： ①能在受体细胞中仿制并安稳保存； ②具有一至多个约束酶切开位点，供外源DNA片段刺进； ③具有符号基因，供重组DNA的判定和挑选。 2.基因工程常用的载体有： 质粒 、 噬菌体 和 动、植物病毒 等。 最早运用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。 三．基因工程的根本进程w.w.w.k.s.5.u.c.o.m (一) 取得意图基因（意图基因的获取） 1.获取办法首要有两种：①从天然界中已有的物种中别离出来，如可从基因文库中获取。 ②用人工的办法组成。 ★取得原核细胞的意图基因可采纳直接别离，获取真核细胞的意图基因一般是人工组成。 ★人工组成意图基因的常用办法有反转录法和化学组成法。 2.运用PCR技能扩增意图基因 （1）PCR的含义：是一项在生物体外仿制特定DNA片段的核酸组成技能。 （2）意图：获取很多的意图基因高考资源网 （3）原理：DNA双链仿制 （4）进程：第一步：加热至90～95℃DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热安稳DNA聚合酶从引物开始进行互补链的组成。 （5）特色：指数方式扩增 (二) 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建） 1．重组DNA分子的组成：除了意图基因外，还有必要有符号基因。 ★符号基因的效果：判定受体细胞中是否含有意图基因，然后将含有意图基因的细胞挑选出来。 2．办法：同种约束酶别离切开载体和意图基因，再用DNA衔接酶把两者衔接。 (三) 转化受体细胞（将意图基因导入受体细胞） 1.转化的概念：是意图基因进入受体细胞内，而且在受体细胞内坚持安稳和表达的进程。 2.常用的转化办法： ①将意图基因导入植物细胞：选用最多的办法是农杆菌介导转化技能（农杆菌转化法），其次还有基因枪介导转化技能（基因枪法）和花粉管通道技能（花粉管通道法）。 ②将意图基因导入动物细胞：最常用的办法是显微打针技能。此办法的受体细胞多是受精卵。 ③将意图基因导入微生物细胞：Ca＋处理法。 (四) 挑选出取得意图基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导意图基因的表达（意图基因的检测与判定） 1.首要要检测转基因生物的染色体DNA上是否刺进了意图基因，办法是选用DNA分子杂交技能。 2.其次还要检测意图基因是否转录出mRNA，办法是选用DNA分子杂交技能。 3.最终检测意图基因是否翻译成蛋白质，办法是选用抗原—抗体杂交技能。 4.有时还需进行个别生物学水平的判定。如抗虫或抗病的判定等。 第二节 基因工程的运用 1．运用基因工程改进动植物品种最杰出的长处是：能打破常规育种难以打破的物种之间的边界。 2．基因工程的运用 （1）植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，运用转基因改进植物的质量。 （2）动物基因工程：进步动物成长速度来进步产品产值、改进产品质量，用转基因动物出产药物，用转基因动物作器官移植的供体等。 （3）基因确诊和基因医治： 基因确诊：又称为DNA确诊，是选用基因检测的办法来判别患者是否呈现了基因反常或携带病 原体。 基因医治：指运用正常基因置换或补偿缺点基因的医治办法。 实例：ADA基因缺点症的基因医治 第三