兽药中非法添加四环素类药物的检查方法.docVIP

附件1 兽药中非法添加四环素类药物的检查方法 1 适用范围 1.1本方法适用于麻杏石甘散、银翘散、替米考星预混剂、氟苯尼考预混剂、磺胺氯吡嗪钠可溶性粉中非法添加土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素或多西环素的检查。 1.2用于其他兽药制剂中非法添加土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素或多西环素等四环素类药物检查时，需进行空白试验和检测限测定。 2 检查方法 照高效液相色谱法（《中国兽药典》一部附录0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L草酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表梯度洗脱；二极管阵列检测器检测，采集波长范围为200～400nm，分辨率为1.2nm；记录350nm波长处的色谱图。取土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素及多西环素对照品适量，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含10µg的溶液，作为系统适用性溶液，取20µL注入液相色谱仪，同时记录光谱图和色谱图，出峰顺序依次为土霉素、四环素、金霉素、多西环素，相邻峰之间的分离度均应符合要求。供试品溶液中如有土霉素、四环素、金霉素或多西环素峰，与相邻峰的分离度应符合要求。 时间（min） A% B% 0 90 10 3 90 10 15 70 30 20 70 30 22 90 10 测定法 取供试品1.0g，置锥形瓶中，加0.01mol/L的盐酸溶液100 ml，超声处理5分钟，摇匀，滤过，取滤液5.0ml，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至25ml，摇匀，作为供试品溶液。另取土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素或多西环素对照品适量，用0.01mol/L的盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含10µg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各20µL注入液相色谱仪，同时记录色谱图和光谱图。必要时，可调整供试品溶液或对照品溶液的浓度，使两者峰面积近似。通过与对照品溶液色谱图保留时间、光谱图的比对，确定供试品中是否含有土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素或多西环素。 3 结果判定 3.1供试品溶液色谱图中如出现与土霉素、四环素、金霉素或多西环素对照品保留时间一致的峰（差异小于等于±5%），且为单一物质峰；在规定的采集波长范围内，两者紫外光谱图匹配，且最大吸收波长一致（差异小于等于±2nm），判定为检出土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素或多西环素。 3.2 供试品溶液色谱图中峰保留时间与土霉素、四环素、金霉素或多西环素对照品峰一致，但峰面积小于检测限峰面积，判定为未检出土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素或多西环素。 4 检测限 本方法检测限土霉素、盐酸四环素为0.5g/kg，盐酸金霉素、多西环素为1.0g/kg。 附图1： 四环素类药物混合标准溶液色谱图 注：出峰顺序依次为：土霉素、四环素、金霉素、多西环素 附图2：四环素类药物混合标准溶液光谱图 附件2 兽药固体制剂中非法添加酰胺醇类药物的检查方法 1 适用范围 1.1 本方法适用于兽药固体制剂（健胃散、止痢散、球虫散、胃肠活、阿莫西林可溶性粉、氨苄西林可溶性粉、硫酸新霉素可溶性粉、盐酸大观霉素林可霉素可溶性粉、盐酸土霉素预混剂、注射用盐酸土霉素、盐酸金霉素可溶性粉、酒石酸泰乐菌素可溶性粉、硫酸红霉素可溶性粉、替米考星预混剂、盐酸林可霉素可溶性粉、硫酸粘菌素可溶性粉、恩诺沙星可溶性粉、盐酸环丙沙星可溶性粉、氧氟沙星可溶性粉、盐酸环丙沙星小檗碱预混剂、阿苯达唑伊维菌素预混剂、阿维菌素粉、地克珠利预混剂、维生素C可溶性粉、复方维生素B可溶性粉）中非法添加的酰胺醇类药物（甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素）的检查。 1.2 用于其它兽药固体制剂药物中非法添加酰胺醇类药物（甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素）检查时，需要进行空白试验和系统适用性试验，供试品溶液中甲砜霉素、氟苯尼考和氯霉素色谱峰与相邻的色谱峰分离度应符合要求。必要时可采用二极管阵列检测器进行峰纯度检测。 2 检查方法 照高效液相色谱法（《中国兽药典》2015版一部附录0512）。 色谱条件与系统适用性 用十八烷基键合硅胶为填充剂（Waters Atlantis T3 4.6mm×250mm, 5µm,或其他等效的色谱柱）；以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，水为流动相C，流速为1ml/min，按下表进行洗脱；二极管阵列检测器检测，采集波长范围为190nm~400nm，分辨率为1.2nm，分别记录224nm和278nm波长处的色谱图。 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 流动相C（%） 0 13 12 75 12 13 12 75 26 0 40 60 30 13 12 75 35 13 12 75 分别取甲砜霉素、氟苯尼考、氯霉素对照品适量，加40%甲醇溶液超声使溶解，制成每1ml中各含约50µg的溶液，作为系统适用性溶