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miR一224在胃癌组织和细胞中的表达及其临床意义中文摘要 miR一224在胃癌组织和细胞中的表达及其临床意义 中文摘要 研究背景：胃癌是世界最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率均较高，严 重威胁着人们的健康，目6，J．其治疗效果仍不理想。因而寻找理想的胃癌早期诊断 的标记物和有效治疗靶点，对改善胃癌患者的预后有着重要的意义。微小RNA(m icroRNA，miR)是一类长度约为22nt的内源性的无编码蛋白功能性的RNA，它们 通过miRNAs介导的特异性的基因沉默调节靶mRNAs的降解或者翻译抑制，进 而在胃癌的发生发展过程中起着致癌或者是抑癌的作用。近年来研究显示， miRNAs在组织中表达的差异性与人类恶性肿瘤的发生、发展存在着密切的相关 性，参与着一系列生物／土理和／或病理过程，这其中包括细胞的增殖、凋亡、分 化、侵袭和转移等多种过程，影响着几乎所有的信号通路。目6，J．，针对miRNAs 与肿瘤的相关性的研究充分体现了miRNAs参与基因调控的多样性和复杂性。其 在各种生理病理过程中起到的重要作用j卜在被深入研究。故此，以miRNAs作为 新切入点，为胃癌预防、临床诊断和治疗丌辟了一条新的道路。 目的：检测miR．224在人胃癌细胞系(SGC一790l、AGS、BGC一823、MKN一45、 MKN一28和HCG一27)和人正常胃粘膜上皮细胞GES一1及人胃癌组织中的表达情 况：探讨miR．224在胃癌组织中的表达与胃癌患者预后的相关性，以及miR一224 对人胃癌细胞株SGC一7901增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：应用TRIZOL试剂提取人的胃癌细胞株(SGC一7901、AGS、BGC一823、 MKN．45、MKN．28、HCG．27)及人『F常胃上皮细胞GES．1和44对胃癌组织及 与其配对的癌旁非肿瘤胃粘膜组织的miRNA，合成cDNA，应用RT-PCR法检 测miR．224在其中的表达情况。 应用原位杂交法检测miR．224在112例石蜡固定的人的胃肿瘤组织切片及50 例癌旁非肿瘤胃粘膜组织中的表达情况，并分析其与患者各病理参数及预后的关 系。实验步骤按照原位杂交试剂盒的说明书进行。 使用6孔板培养胃癌细胞株，5．0×1 O’个细胞／孔(严格按细胞培养步骤)24 小时。将miR．224抑制物和inhibitor Negtive control试剂转染至胃癌SGC-7901 细胞株，转染后24小时，RT-PCR检测miR一224的表达水平，应用MTT、细胞 克隆法检测SGC一7901生长、增殖情况；使用迁移试剂盒进行细胞迁移实验观察 SGC一7901的迁移能力：应用侵袭试剂盒行细胞侵袭实验，观察SGC一790l的侵 袭能力。实验步骤严格按照试剂盒说明书进行。 结果：RT-PCR结果显示：miR．224在人胃癌细胞株SGC一7901、 MKN-45、 温州医学院帧I‘学位论义BGC一823和AGS中表达量较人jF常胃粘膜上皮细胞GES-1明显上调；与癌旁 温州医学院帧I‘学位论义 BGC一823和AGS中表达量较人jF常胃粘膜上皮细胞GES-1明显上调；与癌旁 非肿瘤胃粘膜组织相比，65．9％(29／44)I拘胃癌组织中miR-224表达水平上调 (t=3．203，P=0．003)。 原位杂交结果表明：miR一224在癌旁非肿瘤胃黏膜组织中表达阴性，而在胃 癌组织中55例(49．1％)miR一224表达阳性，其阳性表达与浸润深度、淋巴结转 移、远处转移及TNM分期有关(P0．05)，而与患者的年龄、性别、肿瘤的部位、 分化程度、肿瘤大小、Lauren分型无相关性(P0．05)。miR一224表达阴性比miR一224 表达阳性的患者5年生存率高(60。O％VS 21．1％；P0．001)。并且在TNM分期 I、II期*0III、IV中表达均有统计学意义，分别(P=0．001和尸=0．011)。COX 多因素分析示：miR．224的表达(尸=0．01 1)是影响胃癌患者预后的独立因素之一。 胃癌SGC．7901细胞株转染miR一224抑制物24小时后，转染miR一224抑制 物组的相对表达量显著低于inhibitor Negtive control(阴性对照)组和空白对照 组。SGC一7901在转染后接种至96孔板后的24、48、72小时后，转染miR-224 抑制物组的增箔率显著低于阴性对照组，差异具有统计学意义。SGC一7901细胞 株在转染miR．224抑制物和inhibitor Negtive control试剂24小时后做迁移、侵袭 和细胞克隆实验： 24小时后HE染色观察迁移结果，转染miR一224抑制物组的 细胞迁移细胞数显著少于阴性对照组(P0．001)，差异具有统计学意义；48小 时后