分子生物学复习.pptVIP

;;;;组蛋白的特性;;;;转录的不对称性：;转录单元（transcription unit）;（二） 启动子(promoter); ;1、核心启动子;三、转录的基本过程; 帽子结构功能： ①能被核糖体小亚基识别，促使mRNA和核糖体的结合； ②m7Gppp结构能有效地封闭mRNA 5’末端，以保护mRNA免受5’核酸外切酶的降解，增强mRNA的稳定。 ;;2、真核生物mRNA的特征;六、RNA合成与DNA合成异同点;不同点：;4·4·6 蛋白质生物合成抑制剂;第一节 基因操作的主要技术原理 ; 在凝胶电泳中，一般加入溴化乙锭（EB）--ethidium bromide染色，此时，核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看到约50ng DNA所形成的条带。 ?? DNA的脉冲电场电泳技术 :PFGE-Pulse-field gel electrophoresis;2． 核酸的分子杂交技术 ??? 在大多数核酸杂交反应中，经过凝胶电泳 分离的DNA或RNA分子，都是在杂交之前，通过毛细管作用或电导作用按其在凝胶中的位置原封不动地“吸印” 转移到滤膜上的。 常用的滤膜有尼龙滤膜、硝酸纤维素滤膜，叠氮苯氧甲基纤维素滤纸（DBM）和二乙氨基乙基纤维素滤膜（DEAE）;核酸分子杂交实验包括如下两个步骤：?? 1.将核酸样品转移到固体支持物滤膜上，这个过程特称为核酸印迹(nucleic acid blotting)转移，主要有电泳凝胶核酸印迹法、斑点和狭线印迹法(dot and slot blotting)、菌落和噬菌斑印迹法(colony and plaque blotting)；?? 2.将具有核酸印迹的滤膜同带有放射性标记或其它标记的DNA或RNA探针进行杂交。所以有时也称这类核酸杂交为印迹杂交。 ;3． 细菌的转化 ??? 所谓细菌转化，是指一种细菌菌株由于捕获了来自另一种细菌菌株的DNA，而导致性状特征发生遗传改变的生命过程。这种提供转化DNA的菌株叫做供体菌株，而接受转化DNA的寄主菌株则称做受体菌株。大肠杆菌是最广泛使用的实验菌株。在加入转化DNA之前，必须预先用CaCl2处理大肠杆菌细胞，使之呈感受态（Competent Cells）。Mg2+对维持外源DNA的稳定性起重要作用，质粒DNA中的抗生素是筛选标记。???;7. PCR技术（基因的体外扩增法）;( 2). 一个PCR体系的基本组成;(4) . PCR的主要步骤;转化子筛选指示系统—蓝白斑筛选 在培养???中加入诱导物IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）和底物x-gal，IPTG诱导LacZ表达产生?-半乳糖苷酶， ?-半乳糖苷酶使x-gal水解，产生兰色化合物，形成兰色菌落； 当插入外源片段，使LacZ基因失活，形成无色菌斑。;;基因表达是受调控的，可在多个层次上进行，包括：基因水平、转录水平、转录后水平、翻译水平、翻译后水平的调控。;二、基因表达的时间性及空间性;（二）空间特异性;三、基因表达的方式;三、基因表达的方式;无论表达水平高低，管家基因较少受环境因素影响，而是在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。区别于其他基因，这类基因表达被视为组成性基因表达(constitutive gene expression)。;（二）诱导和阻遏表达;在一定机制控制下，功能上相关的一组基因，无论其为何种表达方式，均需协调一致、共同表达，即为协调表达(coordinate expression)，这种调节称为协调调节(coordinate regulation)。;四、基因表达调控的生物学意义;五、基因表达调控的基本原理;;6.2.2 弱化子对基因活性的影响;二、操纵子学说;三、乳糖操纵子调节机制;（三）CAP的正性调节;机制： cAMP-CAP是一个重要的正调节物质，可以与操纵子上的启动子区结合，启动基因转录。 葡萄糖的存在可抑制细菌细胞中的腺苷酸环化酶，减少了环腺苷酸(cAMP)的合成，与它结合的受体蛋白质CAP因找不到配体而不能形成复合物。 葡萄糖存在时，不易形成复合物cAMP-CAP，受其调控的基因就不表达。如果培养基中葡萄糖的含量下降，腺苷酸环化酶活力就会相应提高，cAMP合成增加，cAMP与 CAP形成复合物并与启动子结合，促进乳糖操纵子的表达。;负性调节与正性调节协调合作 阻遏蛋白封闭转录时，CAP不发挥作用 如没有CAP加强转录，即使阻遏蛋白从P上解聚仍无转录活性 ☆葡萄糖/乳糖共同存在时，细菌优先利用葡萄糖 葡萄糖可降低cAMP浓度，阻碍其与CAP结合从而抑制转录 结论：lac操纵子强的诱导作用既