分子生物学：转录.pptVIP

第三章 生物信息的传递（上） ——从DNA到RNA;RNA;碱基的位置以起始位点为准，转录起始位点被定为+1，位于其下游的碱基序数按顺序值递增。起始位点前的一个碱基的位置被定义为-1，越靠近转录起始位点上游，碱基负值也越大。;;关于基因表达的两个基本问题;第一节 信使的发现;1956年E. Volkin和 L.Astrachan，用同位素脉冲—追踪标记，表明T2噬菌体新合成的RNA的碱基比和它的DNA碱基比相似，而和细菌的碱基比不同。由于T2感染细菌时注入的是DNA，而在细胞里合成的是RNA， 此表明什么？;;Jacob和Monod预言: （1）这种“ 信使”应是一个多核苷酸； （2）其分子平均不小于5?105bp,足以携带一个基因的遗传信息； （3）它们至少是暂时连在核糖体上； （4）其碱基组成反映了DNA的序列； （5）它们能高速更新。 Jacob和Monod将它定名为:信使RNA（Messenger RNA）或mRNA。 ;第二节 RNA的酶促合成;12~14bp;E.coli在 0?C时需13秒钟才能加上一个核苷酸，但在37?C每秒就可加上40个核苷酸;利用这个差别以14C来标记U,在0?C培养E.coli。 提取这种正在伸长的mRNA分子，发现14C标记首先出现在伸长的3′端，因此可以证明合成是延着5′-3′方向进行的。;RNA合成和DNA复制的区别;二 转录的基本过程;第三节 细菌基因的转录;分子生物学：转录;原核生物转录的起始延伸;典型启动子的结构;-10序列对转录的效率影响;典型启动子的结构;典型启动子的结构;理想的启动子;σ因子的更替可控制转录起始;分子生物学：转录;分子生物学：转录;;大肠杆菌σ70的保守区 2.1 和2.2 区负责与核心酶的对接。 2.3 区为熔化DNA链所必需， 2.4 和4.2 区与-10 和-35 启动子顺序结合。 N-端阻止2.4 和4.2 区在没有核心酶的时候与DNA的结合。;分子生物学：转录; Mfd（转录修复耦联因子）识别出停滞不前的RNA聚合酶并指导损伤模板的DNA修复。 Mfd蛋白有两个作用： 第一，它把RNA聚合酶三元复合体从DNA上取代下来； 第二，它使UvrABC酶结合到损伤DNA链上去，引导外切修复系统来修复DNA。 当DNA被修复后，另一个RNA聚合酶就能结合到基因上，从而制造出正常的转录物。;原核生物转录的终止;---NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCTTTTTTNNN---;内源性终止子;;ρ- 依赖型终止子;ρ因子如何行使功能;;分子生物学：转录;分子生物学：转录;第四节 真核生物的转录;转录因子;一.真核的RNA聚合酶;;真核生物的启动子;典型地，由RNA聚合酶Ⅱ所转录的基因应该有一个位于转录起始点上游的启动子。启动子含有几个短的能结合转录因子的序列元件(10bp)，分布在超过200bp的范围内。增强子含有一簇更加紧密排列的可结合转录因子的元件，但可以位于距离转录起始点几个kb的位置上。(DNA可能的卷曲或重排，使得结合到启动子和增强子上的转录因子之间可以相互作用，从而形成一个大的蛋白质复合体。);启动子Ⅱ最为复杂，它和原核的启动子有很多不同： 有多种元件：TATA框，GC框，CAAT框，OCT等； 结构不恒定； 它们的位置、序列、距离和方向都不完全相同； 有的有远距离的调控元件存在，如增强子； 这些元件常常起到控制转录效率和选择起始位点的作用 不直接和RNA pol结合； 需多种转录因子介入。;RNA聚合酶II的转录起始;RNA聚合酶II的核心启动子;RNA聚合酶II的核心启动子;RNA聚合酶II的核心启动子;上游启动子元件（UPE）;上游启动子元件（UPE）;启动子的组成是可变的;远端调控区;分子生物学：转录;真核RNA聚合酶II启动子和增强子通过蛋白质的介导互相结合，形成环，启动转录(引自Griffithset al1999) ;远端调控区;分子生物学：转录;Ⅱ类基因的启动子和调控区;II类启动子上基本转录装置的装配;稳定TFⅡD和DNA的结合，激活TBP亚基;II类启动子上基本转录装置的装配;;分子生物学：转录;TFIIH核心在转录起始中和激酶结合在一起； 而当遇到损伤DNA时，他就和修复复合体结合在—起。;RNA聚合酶I启动子;RNA聚合酶I启动子转录起始复合体的装配;;RNA聚合酶III启动子;小结;启动子由若干位于起始点上游区域中的短序列元件组成，每种元件都可和一个转录因子相结合。 增强子可以激活启动子，增强子序列可以从远距离并且以两种取向中的任一取向在基因的两侧发挥作用，它也由几组元件组成，不过它们排列得更加紧密，其中一些元件在启动子和增强子中都存在。增强子可能通过装配蛋