基因在肌细胞增殖分化中的调控作用.docxVIP

Mybph基因在肌肉发育中的调控作用研究目 Mybph基因在肌肉发育中的调控作用研究 目 录 摘要 ．i ABSTRACT ．．iii 缩略语表 ．v 1前言 1 1．1研究问题的由来 1 1．2骨骼肌生长发育调控相关研究 1 1．2．1骨骼肌发育的基本过程 2 1．2．2骨骼肌生长发育过程中主要调控因子研究进展 3 1．2．3骨骼肌的再生 5 l-3 Mybph基因研究进展 6 1．3．1 Mybph基因的结构 ．6 1．3．2 Mybph基因的功能研究进展 ．7 1．4研究目的与意义 9 2实验材料与方法 lO 2．1材料 ．10 2．1．1猪组织样品 ．．10 2．1．2细胞系、载体和菌株 一lO 2．1．3主要试剂与试剂盒 ．．11 2．1．4主要试剂的配制 一12 2．1．5主要仪器设备 ．．13 2．1．6主要生物学分析软件及网站 ．．14 2．2试验方法 ．14 2．2．1组织和细胞总RNA的提取 14 2．2．2 eDNA的合成 15 2．2．3引物的设计 ．．16 2．2．4 PCR扩增反应 l 7 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文2．2．5猪组织表达谱的构建 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 2．2．5猪组织表达谱的构建 l 7 2．2．6真核表达载体的构建 18 2．2．7干涉片段的合成 21 2．2．8细胞培养及质粒转染 2l 2．2．9激光共聚焦技术 23 2．2．10细胞增殖实验 ．23 2．2．1 l免疫荧光技术 ．24 2．2．12 Western Blot技术 一25 2．2．13细胞周期的测定 ．28 3结果与分析 30 3．1 Mybph基因的组织表达谱 ．．30 3．2生物信息学对小鼠Mybph蛋白亚细胞定位的预测 ．30 3．3 Mybph在C2C12细胞中的表达定位 3l 3．4真核表达载体pcDNA3．1(+)．Mybph的构建 ．32 3．4．1 C2C12细胞RNA的提取及cDNA的合成 ．32 3．4．2 PMD-18T-Mybph质粒与真核表达载体pcDNA3．1(+)的双酶切 33 3．5干涉片段的选择 ．．34 3．6Mybph基因在C2C12细胞分化过程中的时空表达情况 ．34 3．7 Mybph基因对C2C12细胞分化的影响 ．35 3．7．1超表达Mybph基因对C2C12细胞分化的影响 35 3．7．2干涉Mybph基因对C2C12细胞分化的影响 ．36 3．8 Mybph基因对C2C12细胞增殖的影响 ．38 3．8．1实时无标记分析技术(RCTA)检测Mybph基因对C2C12细胞增殖的影响 ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．．：}8 3．8．2免疫荧光技术检测Mybph基因对C2C12细胞增殖影响 39 3．8．3 Western blot检测Mybph基因对C2C12细胞增殖影响 42 3．9 Mypbh基因对细胞周期的影响 ．．42 4讨论 44 4．1 Mybph基因在成肌细胞时空分化过程中表达差异 ．．44 Ⅱ 万方数据 Mybph基因在肌肉发育中的调控作用研究4．2Mybph基因在猪不同组织的差异性表达 Mybph基因在肌肉发育中的调控作用研究 4．2Mybph基因在猪不同组织的差异性表达 一44 4．3 Mybph基因对成肌细胞增殖、分化的调控 ．．44 4．3．1Mybph基因对成肌细胞分化的影响 45 4．3．2 Mybph基因对成肌细胞增殖的影响 45 总结 ．．46 5小结 ．47 5．1本研究的主要结果 ．47 5．2本研究的创新点 ．48 53下一步工作计划 ．48 参考文献 49 致谢 ．57 lit 万方数据 Mybph基因在肌肉发育中的调控作用研究摘要 Mybph基因在肌肉发育中的调控作用研究 摘要 肌肉发育过程是一个十分复杂的进程，在其发育过程中受到了很多基因及转录 因子的调控。由于肌肉发育的复杂性，虽然现在已经确定了一批对肌肉发育有调控 作用的调控因子，但仍有很多与肌发育相关的基因或转录因子有待研究。有研究报 道，Mybph基因在肌肉发育过程中差异性表达，而且会与其它转录因子共同作用调 控肌肉发育。因此，为了验证Mybph基因对肌细胞的调控作用，我们检测了猪不同 组织中Mybph基因的相对表达情况；通过生物信息学对Mybph蛋白表达位置进行 预测，并使用激光共聚焦技术进行验证；检测Mybph基因在C2C12细胞分化过程中 的时空表达；构建真核表达载体pcDNA3．1(+)-Mybph和合成Mybph基因的干涉片段， 转染C2C12细胞，通过实时无标记细胞分析技术(RTCA)、免疫荧光技术、western blot、流式细胞术、荧光定量PC