生物基因工程的基本操作程序.pptVIP

转基因生物 有几种重组DNA ？ DNA分子 归纳：基因工程的基本过程 思维训练 2、在基因工程技术中，下列方法与目的基因获得无关的是 A.辐射诱变法 B.从基因文库中获取 C.反转录法 D.人工合成法 * 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯 不会引起过敏的转基因大豆 水母 　基因工程的基本 　　操 作 程 序 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些工作？ 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 获 取 目 的 基 因 制 备 重 组 DNA 分 子 转 化 受 体 细 胞 筛 选 重 组 细 胞 基因工程的基本操作程序 实 现 功 能 表 达 学习目标： 1、简述基因工程的五步基本操作程序 2、叙述获取目的基因的方法 3、说明基因表达载体的组成及各组件的功能。 4、说明基因表达载体构建过程。 5、说出三类受体细胞的转导方法。 1、人工合成 (基因比较小，序列已知) 获取目的基因 DNA合成仪 目的基因的获取方法 1）反转录法： 蛋白质 mRNA DNA 推测 推测 DNA DNA合成仪合成仪 合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 2、从基因文库中获取 (基因序列未知) 基因文库 基因组文库 部分基因文库 目的基因的获取 3、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应 目的基因的获取 3、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应 目的基因的获取 作为基因表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 制 备 重 组 DNA 分 子（基因表达载体的构建） 基因工程的核心 基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 运载体 目的基因 限制酶切 同一种 黏性末端 黏性末端 DNA连接酶 重组DNA分子 基因表达载体的构建 质粒 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在 受体细胞内维持稳定和表达的过程。 转 化 受 体 细 胞 常用的受体细胞种类： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞等 转化受体细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 氯化钙法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 原核细胞 农杆菌转化法 适用于 双子叶植物 裸子植物 适用于 单子叶植物 基因枪法 花粉管通道法 适用于 被子植物 将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 实验 抗原－抗体杂交法 DNA-RNA分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有 转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 筛 选 重 组 细 胞 实 现 功 能 表 达 (目的基因的检测与表达) 个体生物学水平 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 五个步骤： 1、获取目的基因 2、制备重组DNA分子 3、转化受体细胞 4、筛选重组细胞 5、实现功能表达 1、基因工程又叫基因拼接技术。 （1）在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的___________为模板，__________成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成__________。 mRNA 双链DNA 反转录 A *