电离辐射的分子生物学效应.ppt

（三）DNA交联 包括DNA链交联和DNA-蛋白质交联 1. DNA-DNA链交联 （1）链内交联：DNA分子同一条链上的两个碱基相互以共价键结合；紫外线照射能引起较多的DNA链内交联，而电离辐射的效应较小； （2）链间交联：DNA双螺旋结构中，一条链上的碱基与其互补链上的碱基以共价键结合；DNA 链间交联多见于化学损伤，如氮芥、硫芥等；放射损伤时较少见到。 * ppt课件 （1）链内交联 * ppt课件 环丁烷嘧啶二聚体 6–4嘧啶–嘧啶酮光化产物 * ppt课件 核小体结构(Nucleosome) * ppt课件 第二节 DNA损伤类型、检测手段和修复机制 * ppt课件 间接作用：DNA周围其他分子（主要是水分子）吸收射线能量产生具有很高反应活性的自由基，这些自由基可以扩散到足够远，到达并损伤DNA，引起DNA的结构功能破坏。 直接作用：电离辐射的能量直接被射DNA吸收，靶原子本身的原子可以被电离或激发，从而启动一系列的生物变化事件。 电离辐射对DNA的直接作用和间接作用 * ppt课件 （一）碱基损伤 碱基的脱氨基作用 脱嘌呤与脱嘧啶 碱基修饰 碱基修饰与链断裂　细胞呼吸的副产物或者射线的能量被H2O吸收，将会造成DNA损伤，此外，体内还可以发生DNA的甲基化，结构的其他变化等，这些损伤的积累可能导致老化；这些损伤可引起DNA双螺旋的局部结构改变，每个哺乳类细胞每天DNA单链断裂发生的频率约为5万次。 * ppt课件 Dizdaroglu M等人的工作表明：羟自由基“喜好”攻击嘧啶碱的 5、6位，腺嘌呤的8位， 鸟嘌呤的4、5、8位。鸟嘌呤C-8位易受到羟自由基及单线态氧的攻击而发生羟化，生成加合物8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2-deoxyguanosine，8-OHdG） 8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2-deoxyguanosine，8-OHdG） 8-羟基脱氧鸟苷将会导致G 到T 转换, 这种转换是人类肿瘤细胞最为常见的体细胞突变（ somatic 　mutation） * ppt课件 8-羟基脱氧鸟苷检测方法 　高效液相色谱－电化学检测器分析 　酶联免疫吸附法 应用单克隆抗体的ELISA法具有很高的灵敏度和很好的重复性，往包被抗 8-OHdG抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗8-OHdG抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的8-OHdG.呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）。 * ppt课件 生物素-亲合素系统 亲和素（avidin）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白；耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用，亲和常数（K）为1015mol/L，比抗原与抗体间的亲和力（K=10.5～11L/mol）至少高1万倍。并且，二者的结合稳定性好专一性强，不受试剂浓度，PH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此，BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。 * ppt课件 碱基切除修复(BER) BER用来清除并修复异常的、不该出现的碱基。这些非A、T、G、C碱基的出现若无适时修复，则DNA聚合酶在复制的过程就很容易在碰到这些碱基时置入错误的配对，即点突变发生；。 BER优先去除基因组上的一些小的、非螺旋扭曲的碱基损伤； 所有细胞中都带有不同类型、能识别受损核酸位点的糖苷水解酶，它能够特异性切除受损核苷酸上的N-β-糖苷键，在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点，统称为无嘌呤无嘧啶(AP)位点；。 DNA分子中一旦产生了AP位点，AP核酸内切酶就会把受损核苷酸的糖苷-磷酸键切开，并移去包括AP位点核苷酸在内的小片段DNA，由DNA聚合酶Ⅰ合成新的片断，最终由DNA连接酶把两者连成新的被修复的DNA链，这一过程即为碱基切除修复。 * ppt课件 糖苷水解酶切割N-beta-糖苷键形成无碱基位点（Abase sites）,糖苷水解酶具有特异性，一种酶对应一种损伤类型； AP核酸内切酶切割，形成5’ 脱氧核糖磷酸，哺乳动物中最为主要的AP核酸内切酶是APE1 人类中5’ 脱氧核糖磷酸裂解酶主要为DNA polymerase β (Polβ) BER * ppt课件 DNA损伤定量试剂盒-AP位点计数 由于醛反应性探针（ARP；N’-氨氧甲基