TTC肉汤二倍稀释法测MIC.pptVIP

一、目的;二、意义;三、菌种;四、药品;五、培养基;六、器材;七、方法步骤;2、不同的抗菌药物原液配制所需的溶剂 溶剂为PH4.5PBS缓冲液的：四环素类 溶剂为PH6.0PBS缓冲液的：青霉素G，半合成青霉素类，头孢菌素类，多粘菌素B硫酸盐 溶剂为PH7.8PBS缓冲液的：氨基糖苷类，林可或氯林可霉素;3、MIC的测定（微量二倍稀释法） 第一步：在96孔板每个孔加入含TTC的空白肉汤100μl 。 图表; 第二步：在A/B/C三排的第一孔加配好的药液A(浓度为512IU/ml或μg/ml)100 μl，然后对药物进行二倍稀释。即，第一孔中加入药液后用移液枪充分吹打（至少三次以上）使药物与肉汤充分混匀，然后吸取100μl加入第二孔再充分吹打使之与肉汤充分混匀，照此重复直至最后一孔，吸取100μl弃去;此时每孔药物浓度从左到右依次为：256，128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125(单位:IU/ml或μg/ml) 图表; 第三步：再在每一孔中加入稀释好的菌液100μl,这样就形成测定一个药物MIC值的三次重复（A/B/C三排样品）。此时每孔药物浓度即最终药物浓度从左到右依次为： 128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.06(单位:IU/ml或μg/ml)； 图表;第四步：在同一块板上的G排上做一排阴性对照（仅加空白肉汤不加菌液）和在H排上做一排阳性对照（加菌液不加药液） 第五步：将96孔板放入37度恒温培养箱16～20小时后，观察结果。 图表 ; ;八、观察及判断结果;九、注意事项：;2、其他注意事项： （1）培养板上用标签纸做好标记，写明组别，做什么菌、什么药，以及各组对照。 （2）每药做三个重复，每个板做一个阴性对照和一个阳性对照。 （3）废液缸，超净台内用过的不需要的东西都必须放到废液缸内，不能在台面乱扔。 （4）实验完后要收拾好台面，所有公用设施恢复原位。 ;十、记录结果的格式;十一、讨论;十二、分组;每组的物品清单