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概念;微生物生长的测定;;全数测定
计数器法
比浊法
活菌计数
稀释平板法(膜过滤法)
液体稀释培养法
细胞物质量的测定(间接测定法);;;4. Direct Microscopic Count
Counting chamber of known volume;;Dilution Results;;;干重法
含氮量法
DNA法
生理指标测定法;把一定微生物接种到一定量的液体培养基中,在一定条件下进行一次性培养,定时取样测定活菌数,以活菌数的对数值为纵坐标,以培养时间为横坐标,就可以画出一条有规律的曲线,这就是微生物的典型生长曲线(growth curve)。
一般把典型生长曲线划分为适应期、对数增长期(指数期)、稳定期和衰亡期等四个时期。
该生长曲线只适用于单细胞微生物,包括细菌和酵母菌。
;; 适应期的出现,可能是因为在接种到新鲜培养液的细胞中,一时还缺乏分解或催化有关底物的酶,或是缺乏充足的中间代谢物。
该时期有几个特点:
生长繁殖的速度几乎等于零。
细胞形态增大;
细胞内RNA尤其是rRNA含量增高,原生质呈嗜碱性。
合成代谢活跃,核糖体、酶类和ATP的合成加快,易产生诱导酶。
对外界不良条件反应敏感。;影响适应期长短的因素很多
菌种的菌龄 菌龄即“种子”(inoculum)的群体生长年龄,亦即它处在生长曲线上的哪一个阶段。
接种量 接种量的大小明显影响适应期的长短。
培养基成分
;生产上——尽量缩短延滞期;又称为指数增长期(exponential phase),是指在生长曲线中,紧接着适应期的一个细胞以几何级数速度分裂的一段时期。
对数增长期有以下几个特点:
生长繁殖的速度很快,世代时间均匀一致;
酶系活跃,代谢旺盛。
菌细胞的形态特征均匀一致,最代表种的特征;
此时期内的微生物的生化特性均匀一致,并且典型。 ;; 影响指数期的因素;;特点
生长速率几乎等于死亡速率,细胞浓度不增加。
基质大量消耗,代谢物大量积累。
生产上
尽量延长稳定期;稳定期到来的原因主要是:
①营养物尤其是生长限制因子的耗尽;
②营养物的比例失调,例如C/N比值不合适等;
③酸、醇、毒素或H2O2等有害代谢产物的累积;
④pH、氧化还原势等物化条件越来越不适宜等等。
???稳定期时,细胞开始贮存糖原、异染颗粒和脂肪等贮藏物;多数芽孢杆菌在这时开始形成芽孢;有的微生物在稳定期时还开始合成抗生素等次生代谢产物。;特点
死亡速率大于生长速率
菌体开始自溶
细胞形态多样,染色性改变
生产上
要掌握发酵时间
; 微生物的分离与纯培养;;物理因素
温度
水分活度
氧气和氧化还原电位
辐射作用
化学因素
pH值
可抑制或杀灭微生物的常见化学物
生物因素对微生物生长的影响
;;不同微生物类群适应的温度范围 ; 高温和低温对微生物的影响 ;;低温用于食品保藏;;微生物;;;厌氧菌有氧毒害的机理;; 电离辐射;1、总体说,M生长2<pH<9,少数例外.绝大多数在5-9
2、每种M,有自己的生长pH三基点:最低、最适和最高pH值。
大肠杆菌:
最低pH4.3,最适pH6.0-8.0,最高pH9.5。
;; pH的影响机制;培养基pH变化的原因及调节
原因:
1.大多数M使培养基pH下降.如乳酸菌分解G产生乳酸
2、有些M使培养基pH上升.如尿素细菌水解尿素产生氨;; 生产中的应用
1、发酵食品:酸奶、酸菜等
2、酸渍食品:如加入醋酸,增加食品风味。
3、消毒防腐:如醋酸,可杀死沙门氏菌,大肠杆菌等。
条件:对人体无毒害,不影响食品的风味,加入食品后的含量应不超过规定的标准。;;;;选择培养基分离法;;;;;;;;
分批培养:
连续培养:将新鲜培养基连续加入均匀搅拌的培养物中,保持细胞浓度、比生长速率、培养环境不随时间变化,维持稳定状态的培养过程。
;分批培养; 连续培养是在研究生长曲线的基础上,当微生物以单批培养的方式培养到指数期的后期时,一方面以一定速度连续流加新鲜培养基,并立即搅拌均匀,另一方面,利用溢流的方式,以同样的流速不断流出培养物。这样,培养物就达到动态平衡,其中的微生物可长期保持在指数期的平衡生长状态和稳定的生长速率上。;;;其优点:
高效,它简化了装料、灭菌、出料、清洗发酵罐等许多单元操作,从而减少了非生产时间和提高了设备的利用率;
自控,便于利用各种仪表进行自动控制;
产品质量较稳定;
节约了大量动力、人力、水和蒸汽,且使水、汽、电的负荷均匀合理。
;连续培养方法
恒化器法
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