生物技术制药第七章 酶工程制药.pptVIP

第七章 酶工程制药 ;第一节 概 述 ;一、酶的特性 ;二、酶工程简介 ;1.酶的分离、提纯、大批量生产及新酶和酶的应用开发 2.酶和细胞的固定化及酶反应器的研究 3.酶生产过程中基因工程技术的应用及遗传修饰酶的研究 4.酶的分子改造与化学修饰、以及酶的结构与功能之间关系的研究 5.有机相中酶反应的研究 6.酶的抑制剂、开发及其应用研究 7.抗体酶、核酸酶的研究 8.模拟酶、合成酶、酶分子的人工设计、合成的研究 用农杆菌做载体将外源基因导入植物基因组的方法比较成熟 ;第二节 酶的来源和生产 ;??、酶的来源 ;二、酶的生产菌 ;3.常用产酶微生物 ;三、提高药用酶产量的措施 ;第三节 酶和细胞的固定化 ;使用纯酶的缺点 只能使用一次，成本高，产品分离困难；酶溶液很不稳定，容易变性和失活 固定化酶的优点 性能稳定；可反复使用，降低了成本，易与产品分离，简化下游操作 ;一、固定化酶的制备 ;（1）载体结合法：物理吸附法、离子结合法、共价结合法；（2）交联法（3）包埋法：网格型、微囊型（4）选择性热变性法——专门用于细胞固定化的方法，即将含酶的细胞在 适当温度下处理，使细胞膜蛋白变性，但酶蛋白不变性而使酶固定于 细胞内;二、固定化细胞 ;第五节 酶工程在医药工业中的应用 ; 工艺简单、效率高、生产成本低、环境污染小、产品收率高、纯度好、还可制造出化学方法无法生产的产品 ;一、酶在疾病预防和治疗方面的应用 ;2.α-淀粉酶 消化药 3.脂肪酶 消化剂。假单胞菌脂肪酶能分解血液中的低密度脂蛋白和乳糜微 粒，可用于预防和治疗高血脂病4.右旋糖苷酶 水解右旋糖苷生产小分子产物，对龋齿有显著的预防作用，可 加到牙膏和漱口水中5.溶菌酶 抗菌、消炎、镇痛作用，作用于细胞壁，使其受到破坏，而使病原 菌、腐败性细菌等溶解死亡6.超氧化物歧化酶 抗氧化、抗辐射、抗衰老、保护机体的DNA、蛋白质和细 胞膜免受超氧负离子的破坏。对红斑狼疮、皮肤炎、结肠炎、白内 障、风湿性关节炎、氧中毒等疾病有显著疗效，对辐射有防护作用7.乳糖酶 治疗乳糖缺乏症，有些人或婴儿肠道中缺乏乳糖酶，饮用含有乳糖 的牛奶等食品时，由于不能分解乳糖，在肠道中，乳糖会因为细菌 分解而产生有机酸，刺激肠道引起呕吐8.链激酶 可催化纤维蛋白酶原，激活成纤维蛋白酶，将纤维蛋白水解，使血 栓溶解 9.尿激酶 溶解血栓 ;二、固定化细胞法生产6-氨基青霉烷酸 ;1.技术原理;2.工艺路线 ;（3）固定化大肠杆菌反应堆制备 将上述充分洗涤后的固定化大肠杆菌细胞装填于带保温夹套的填充式反应器中，即成为固定化大肠杆菌反应堆，反应器规格为直径70*160厘米 （4）转化反应 取20公斤青霉素G钾盐，加入到1000升配料罐中，用0.03摩尔每升、pH7.5的磷酸缓冲液溶解并使青霉素G钾盐浓度为3%，用2摩尔每升氢氧化钠溶液调pH至7.5-7.8，然后将反应器及pH调节罐中反应液温度升刀0度，维持反应体系的酸度在7.5-7.8范围内，以70L/min流速使青霉素G钾盐溶液通过固定化大肠杆菌反应堆进行循环转化，直至转化液酸度不变为止。循环时间一般为3-4小时，反应结束后，放出转化也8，再进入下一批反应 （5）6-氨基青霉烷酸的提取 上述转化液经过滤澄清后，滤液用薄膜浓缩器减压浓缩至100升左右，冷却至室温后，于250升搅拌罐中加50升醋酸丁脂充分搅拌提取10-15分，取下层水相，加1%克每毫升活性炭于70度搅拌脱色30分，滤除活性炭，滤液用6摩尔每升盐酸调酸度至4左右，5度放置结晶过夜，次日滤取结晶，用少量冷水洗涤，抽干，115度烘2-3小时得成品6-氨基青霉烷酸，收率为70-80% ;三、固定化酶法生产5’—复合单核苷酸 ;;（3）转化反应 取2公斤核酸，缓慢加至预热至60-70度的360升、pH5.00.001摩尔每升氯化锌溶液中，用摩尔每升氢氧化钠溶液调至pH5.0-5.5，滤除沉淀，将清液升温至70度，加入上述湿的固定化磷酸二脂酶40公斤，，于67度维持pH5.0-5.5，搅拌反应1-2小时，根据增色效应，用紫外吸收法判断转化平衡点，转化完成后，滤出转化液，用于分离5’—单核苷酸，固定化酶再继续用于下一批转化反 （4）5’—复合单核苷酸的分离纯化 将上述转化液用6摩尔每升的盐酸调酸度至3，滤除沉淀，，滤液用6摩尔每升氢氧化钠调酸度至7，进入已处理好的氯-型阴离子交换树脂柱，流速为2-2.5升每分，吸附后，用250-300升去离子水洗涤柱床，然后