第十四章--高效液相色谱法PPT.ppt

思考 1．液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些？与气相色谱相比，有哪些主要不同之处？ 2．在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 3．何谓化学键合固定相？它有什么突出的优点？ 4．何谓梯度洗脱？它有什么突出的优点？ 5．高效液相色谱法各检测器适合分析什么类型的样品？ 学习小结 一、学习内容 基本原理 主要类型 柱内展宽、柱外展宽 液-固吸附色谱法 化学键合相色谱法 高效液相色谱法 洗脱方式 恒定组成溶剂洗脱 梯度洗脱 色 谱 仪 输液系统、进样系统、色谱柱系统、检测系统、数据处理系统 应 用 定性分析、定量分析 二、学习方法 1.高效液相色谱法是在经典液相柱色谱法的基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器而发展起来的快速分离分析方法。其特点是：分离效度高、检出极限低、操作自动化和应用范围广。 2.正确比较高效液相色谱与气相色谱、经典液相色谱异同点。 3.学会高效液相色谱法的操作方法，能够完成复杂成分的分离、定性和定量分析。 4.理解固定相、流动相的选择、要求及洗脱方式。 * 基础化学 第2版 第十四章 高效液相色谱法 第十四章 高效液相色谱法 第一节 高效液相色谱法的基本原理 第二节 高效液相色谱法的主要类型 第三节 高效液相色谱仪及高效液相色谱法的应用 学习要点 1.高效液相色谱法的分类及特点。 2.高效液相色谱法的基本原理，流动相、固 定相的选择，洗脱方式。 3.高效液相色谱仪的基本组成及工作流程。 4.定性和定量方法。 学习目的 通过学习高效液相色谱法的基本理论及操作，以掌握物质分离分析的操作技术，为以后学习药物分析等专业课程奠定基础。 知识要求 掌握化学键合相色谱法的基本概念及基本原理；掌握定性、定量分析方法。 熟悉高效液相色谱仪的主要构造；熟悉分离条件的选择；熟悉化学键合相的性质、特点。 了解流动相的要求和洗脱方式。 能力要求 学会高效液相色谱法的操作；学会定性方法及定量分析方法。 学习目标 第一节高效液相色谱法的基本原理 一、概述 高效液相色谱法(HPLC)：在经典液相色谱和气相色谱 的理论和实验技术基础上建立的一种液相色谱法。 1. HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备，检测手段。 （1）经典LC：仅做为一种分离手段 常压输送流动相，柱效低，分析周期长。 （2）HPLC：分离和分析 高压输送流动相，柱效高，分析时间大大缩短。 2. HPLC与GC比较 相同：兼具分离和分析功能。 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别。 （1）分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品。 占有机物的20%。 HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发 性和热稳定性的限制，占有机物的80% （2）流动相差别： GC：流动相为惰性气体 HPLC：流动相为液体 HPLC特点：分离效能高，分析速度快，高灵敏度， 高选择性，应用范围广泛等。 二、基本原理 （一）柱内展宽 动力学理论：速率理论——Vander方程 l．涡流扩散项(A)：与GC相同 2．纵向扩散项（B/u）：可忽略不计 原因：流动相黏度大，扩散系数小。 3．传质阻力项(Cu)：包括固定相传质阻力、流动 相传质阻力、滞留流动相传质阻力。 结论：在高效液相色谱法中，由于纵向扩散项可以 忽略不计，故高效液相色谱的速率方程可简写为： 因为高效液相色谱法中的涡流扩散项较小，所以，其影响柱效的主要因素是传质项。 基本原理 （二）柱外展宽 柱外展宽：因色谱柱外各种因素引起的色谱峰展宽。主要包括进样系统、连接管路、接头、检测器等色谱柱之外的各种因素。 减少柱外因素对峰宽的影响可采用进样阀进样，使用“零死体积接头”连接管路和内腔体积小的检测器。 （一）固定相 液-固吸附色谱法的固定相有硅胶、氧化铝、高分子多孔微球、分子筛及聚酰胺等。其中硅胶的应用最为广泛。 1. 硅胶：常制备成表孔硅胶、无定形全多孔硅胶、球形全 多孔硅胶及堆积硅珠等类型。 2．高分子多孔微球：也称有机胶(代号YSG)，如国产的YSG-13、日本的日立3010胶。具有选择性好、峰形好等特点。广