分子生物学技术.pptxVIP

分子生物学技术;一、分子生物学概念（一）基本概念（二）基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序（三）基因的结构（四）基因的表达与调控;（一）基本概念基因：是编码蛋白质或RNA分子遗传信息的基本遗传单位。从化学角度观察，基因则是一段具有特定功能和结构的连续的脱氧核糖核酸序列，是构成巨大遗传单位染色体的重要组成部分。顺反子：顺反子和基因这两个术语是互相通用的。一般来说，一个顺反子既是一个基因，大约含有1500个核苷酸对，是由一群突变单位和重组单位组成的线性结构。;因此，顺反子概念表明：基因不是最小单位，它仍然是可分的；并非所有的DNA序列都是基因，而只有其中某一特定的多核苷酸区段才是基因的编码区。每一个顺反子就是一段核苷酸序列，或者是一个基因的DNA或RNA单元，它编码一种完整的多肽链。顺反子是功能单位，它是由许多可以突变的位点组成的，而这些位点之间又可以发生交换。多体蛋白质（multimeric proteins）：由数个亚基组成的蛋白质。;同型多体蛋白质：在多体蛋白质中，如果所有的亚基都是同样的，这种蛋白质就属于同型多体（homomultimer）蛋白质，由一种基因编码。异型多体（heteromultimer）蛋白质：亚基各不相同的蛋白质，由多种基因编码。如血红蛋白。;（二）基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序1. 中心法则（central dogma）：既遗传信息是从DNA流向RNA，再由RNA流向蛋白质而遗传信息从DNA直接到蛋白质的传递，只是一种理论上的可能性，迄今尚未得到证实。;2. 密码子：每3个碱基编码一种氨基酸，就会编码出64种（43=64）不同的氨基酸。蛋白质分子是由20种不同的氨基酸构成的，因此，1种氨基酸可有几个不同的密码子，既3个碱基甚至更多的碱基编码一种氨基酸是必要的。遗传密码是否重叠？研究证实：遗传密码是不重叠的。三联体之间是否存在着“逗号”？研究证实：碱基的阅读是从一个固定的起点按序进行的，不存在有什么“逗号”的问题。…QABCQDEFQGHIQJKLQ…;（三）基因的结构基因的编码区（即转录区）是连续不断??序列，包括一个起始密码子ATG和一个终止密码子TAA。编码区的两侧是转录而不转译的侧翼序列区，其中5`非转译区简称5`UTR，含有一个核糖体结合位点及一个转录起始信号；3`非转译区简称3`UTR含有一个转录终止信号。无论是真核的基因还是原核的基因，都可划分成编码区和非编码区两个基本组成部分。编码区含有大量的可以被细胞质中转译机器阅读的遗传密码，包括起始密码子（通;常是AUG）和终止密码子（UAA，UAG或UGA）。非编码区结构中的5`末端非转译区（5`UTR）和3`末端非转译区（3`UTR），对于基因遗传信息的表述是必要的，但它们都不会被转译成多肽序列。真核基因与原核基因的区别：事实上，真核生物的基因都是以单顺反子的形式存在，因此它们编码的也都是单基因产物。而大肠杆菌类原核生物往往是多顺反子，它转录的是一种大分子量的mRNA，可同时编码两种甚至数种的基因产物。;（四）基因的表达与调控结构基因(structural gene)：编码细胞成份，如代谢酶类、转运蛋白质和细胞骨架成份等的基因。调节基因（regulatory gene)：编码控制其他基因表达的RNA或蛋白质产物的基因。操纵基因（operator): 指接受来自调节基因合成的调节蛋白的作用，使结构基因转录活性得以抑制的特定的DNA区段，也称为控制单元。;储藏在基因中的遗传信息分转录和转译两步进行表达，这种遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的流向，在所有的细胞类型中都是受到高度调节的，同时在有些情况下也是严格协同的。基因表达的此种严格调控机理，保证细胞不会浪费能量用于合成它所不需要的基因产物。从基因研究上，操纵子概念比顺反子又进了一步。即基因不但在结构上是可分的，而且在功能上也是有分工的。同时，有的基因控制蛋白质产物的合成，而有的基因并没有直接的产物。 操纵子模型;二、核酸探测技术（一）指纹图谱（二）核酸分子杂交;（一）、指纹图谱指纹图谱：即核酸酶切图谱，对生物的蛋白质、DNA和RNA进行分析的电泳图、杂交放射性自显影图等。在微生物研究上，主要是用限制性内切酶（ERA）对病毒、细菌DNA进行酶切分析的图谱。原理：在微生物（细菌）细胞中有1种限制性内切酶类（II，称为RE），能特异性的识别和切割DNA链上特定的一段DNA片段，这类酶广泛应用于基因工程的各个方面。ERA就是用RE消化病毒或细菌的DNA或质粒，将消化物于琼脂凝胶中电泳分离，经;溴化乙锭（EB）染色，然后分析DNA酶切片段的数目、迁移率等分析微生物的变异现象、鉴定毒株、分型及了解基因结构和进行流行病学研究等等。方