食品生物技术精品课程.pptxVIP

;第三章 蛋白质改造的分子途径及其蛋白质的异源表达 ; 第二节 蛋白质改造的分子生物学途径; 1．寡核苷酸介导的位点特异性突变;(1)寡核苷酸介导的基因突变中的各种因素;关于DNA模板的制备 双链DNA模板：质粒 单链DNA模板：M13噬菌体载体，足够纯净(避免RNA污染);② 寡核苷酸突变引物的设计和选择 引物特征： 具有和模板DNA的互补区； 足够长，能与目标DNA序列退火； 突变引物应尽可能避免形成稳定二级结构的回文序列、重复序列或自身互补序列； 突变引物不能与目标DNA的其它区域和载体DNA形成稳定??杂交体。 引物设计取决于所要产生的突变类型： 用于单个核苷酸改变的引物，一般长度为17－19个核苷酸； 多处改变核苷酸或改变2个以上，一般长度为25个核苷酸以上。;;;⑤ 存在于dNTP中的dUTP对离体DNA合成反应的影响;⑥ 受体细胞对突变体产率的影响; (2) 几种寡核苷酸介导的基因突变方法 ;① Kunkel 突变法;② 基于抗生素抗性“回复”的突变方法;③ 基于去除特定限制酶切位点的突变;PCR flash;;; 2．区域性定向突变;盒式突变的两个关键问题：;第三节 重组蛋白质的表达;一．表达系统： 基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系，包括克隆载体，表达载体及受体细胞。 ;;根据受体细胞的不同可分为： 1．原核表达系统(大肠杆菌