第五章 动物细胞染色体工程..pptVIP

下篇：动物细胞工程实践之Ⅱ;本章主要内容;染色体工程(Chromosome engineering)--是按照一定的设计,有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体的技术。 由Rich和Khush于1966年最先提出,已成为细胞工程和现代遗传育种的一个重要组成部分。 研究内容和应用范围：人工多倍体诱导、雌核发育、雄核发育、动物染色体结构的改造及人工染色体的构建等。（细胞遗传知识） ;植物(Plant);5.1 自然界的多倍体现象 ;为什么植物中多倍体较多、动物中较少？;(2) 动物中的天然多倍体;人类三倍体问题 ;(3)体细胞多倍体、配子多倍体;②由配子形成的多倍体。在配子形成减数分裂过程中，染色体没有减半，就会产生染色体数目加倍的配子。 染色体数目加倍的配子在受精以后会发育成多倍体。 因此，多倍体可以发生在个体发育的不同阶段：或配子期、或卵裂期、或体细胞分裂期。;①同源多倍体: --系指来源于同一个物种的二倍体以上的个体。 成因：第一，有丝分裂异常。体细胞：在有丝分裂过程中染色体分裂而细胞不分裂，使“2n”变成“4n”。第二，减数分裂异常。配子：性细胞在减数分裂过程中染色体未发生分离，形成的配子仍是二倍体。 如果2n X 2n → 4n；如果2n X 1n → 3n。 ②异源多倍体： ---系指来源于不同的种间或属间物种杂交产生的染色体数大于二倍体的个体。 --成因：先通过种间或远缘杂交，再经染色体加倍而产生异源多倍体。 ;③异倍体/非整倍体;5.2 人工诱导多倍体动物;5.2.1 人工诱导多倍体的机制;(2)抑制第一极体的排放;5.2.2 诱导多倍体动物的方法;(2)物理学方法; ②水静压法 采用较高的水静压（65kg/cm2）抑制第二极体的排放或抑制受精卵第一次卵裂，产生多倍体。优点：诱导率高（在90%～100%），处理时间短，对受精卵损伤小，成活率高。缺点：需专用设备如水压机，成本较高，且处理卵的数量有限，不适于大规模生产。 ;(3)化学方法;5.2.3 多倍体倍性鉴定（直接法、间接法）;5.3 单性生殖与人工诱导的雌、雄核发育;工蜂;5.3.1 人工诱导雌、雄核发育;Hertwig(1911年)首次在两栖类蛙的胚胎获得人工雌核发育的证据。 Hertwig效应：指在适当的高辐射剂量下，导致精子染色体完全失活，届时精子穿入卵内，起到激活卵球启动发育的作用。;Hertwig效应实验：;图5-2 紫外线的照谢剂量对光棘球海胆授精早期胚胎成活率的效应（高悦勉等，水产科学，2003，6：1-4）;②紫外线照射使染色体失活的机理- Hertwig效应原理;（2）雄核发育（androgenesis);5.3.3 哺乳动物雌核发育--卵子的孤雌生殖;(1)卵母细胞孤雌激活类型;A.第二极体排出,形成均质单倍体。 B.激活卵即刻分裂形成两个均等的卵裂球，一个含有雌原核，一个含有第二极体的核，构成嵌合单倍体。 在完成第二次成熟分裂时，第二极体未排出。出现发下三种现象： C-异常的延迟分裂，同样构成嵌合单倍体。 D-两个混合的单倍体原核组成一个二倍体，形成杂合二倍体。 E-雌原核加倍，形成纯合二倍体。 通常具有二倍体的孤雌胚发育较好（D，E）。 ;(2)哺乳动物孤雌胚的发育;5.4 动物染色体结构的改造;（1）放射线诱导发生染色体缺失突变;（2）Cre2loxP介导染色体重组;通过小鼠染色体大片段的删除和重排可以产生一些人为可见的表型。 －－主要建立疾病动物模型来模拟人类的某些疾病，为研究肿瘤抑制基因的识别和疾病的治疗诊断找到了捷径。;5.4.2 染色体的易位（translocation）工程;桑蚕中的W染色体具有决定雌性的绝对功能。在W染色体上，除有决定雌性的基因外，还没有发现能表现其它性状的基因，但人们可以利用χ、γ等物理射线的照射处理，能使带有标志基因的某个染色体片段易位到W染色体上，从而获得好几种限性遗传的类型. 近些年来，运用辐射诱变和染色体工程手段先后培育出有性别标记的限性蚕品种。目前生产上可利用的有卵色限性系，斑纹限性系和茧色限性系，卵色限性系已建立了一个较为完整的系统。;图２　ＣＴＰＹИИИＫＯＢ的卵色限性系统说明：ω２、ｗ3 分别为第二白卵基因、第三白卵基因， +ω２、+ω3．分别为ω２、ω3的等位基因（显性），＋ω２、＋ω3，同时存在表现黑卵。 载有ω２、ｗ3、+ω２、+ω3的是第 10染色体。;5.5 人工染色体;将自主复制DNA序列、着丝粒DNA序列和端粒DNA序列 这3个关键序列组装拼接后就得到人造微小染色体（artificial minichromosome）。 应用：在大片段DNA分子的克隆、基因组分析、基因功能鉴定等研究中得到了广泛的应用，具有极为重要的价值。;目前正在研究或应用的人工染色体;5.5.