生物制药工艺13.5糖类药物.ppt

第十三章(5) 糖类药物 第一节 糖类药物制备的一般方法 一、单糖及其衍生物的制备 一般用水或者乙醇作为溶剂进行提取，然后经过脱色、浓缩、冷却、析出晶体；也可以用层析法。 二、多糖的分离与纯化 （一）多糖的提取 一般材料先进行脱脂、脱水预处理，然后可选用下列方法提取： 1、难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液者 用稀碱液提取 2、易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者 冷水浸过后，热水提取；也可加热搅拌提取 3、粘多糖 由于粘多糖与蛋白质结合在一起，需用酶解法或碱解法使糖-蛋白间的结合键断裂，促使多糖释放。一般组织中有多种粘多糖，还需要进一步分离不同粘多糖，方法有乙醇分级沉淀法或层析法。 （1）碱解法 用0.5M NaOH在40℃溶解组织并提取，提取液以盐酸中和，透析后用高岭土等吸附剂除去蛋白，再用乙醇沉淀多糖。此法一般不破坏多糖分子中的硫酸基。 （2）酶解法 比较常用。而且常与碱解法联用。 （二）多糖的纯化 （1）乙醇沉淀法 此法是制备粘多糖最常用的方法。供乙醇沉淀的多糖溶液浓度以1%-2%为佳。同时向溶液中加入一定浓度（如5%）可有助于多糖的析出。 （2）分级沉淀法 不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的粘多糖。 （3）季铵盐络合法（p388） 利用粘多糖与一些表面活性剂络合成难溶季铵盐。 （4）离子交换层析法 主要利用阴离子交换剂。 第二节 糖类药物 糖类药物主要有： 单糖 如葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和维生素C等； 低聚糖 如蔗糖、麦芽糖乳糖、乳果糖，多糖如右旋糖苷、香菇多糖、茯苓多糖等； 糖的衍生物 如6-磷酸葡萄糖磷酸肌醇等。 糖类药物研究的最多的是多糖类药物，一般都是天然动植物组织内直接提取，如黄芪多糖、人参多糖、麦麸多糖、银耳多糖、灵芝多糖、云芝多糖、酵母多糖、硫酸软骨素、透明质酸、几丁质、胎盘脂多糖等。 多糖类具有多种生理活性： （1）调节免疫功能 影响补体活性，促进淋巴细胞增殖等 （2）抗感染作用 提高身体免疫力 （3）促进细胞DNA、蛋白质的合成，促进细胞增殖、生长 （4）抗辐射损伤作用 抗氧化、防辐射作用 （5）抗凝血作用 如肝素是天然的抗凝剂 （6）降血脂、抗动脉粥样硬化作用 如类肝素硫酸软骨素等 粘多糖：是指含有氨基己糖与糖醛酸的多糖，也叫酸性粘多糖。 粘多糖基本上是由特殊的重复双糖单位构成，在此双糖中，包含一个N-乙酰氨基己糖。 两种糖醛酸：D-葡萄糖醛酸和L-艾杜糖醛酸；两种氨基己糖：氨基-D-葡萄糖和氨基-D-半乳糖。 第三节 重要糖类药物生产工艺 一、D-甘露醇 （一）结构与性质 又名己六醇，为白色针状晶体，略有甜味，不潮解；易溶于水。 （二）生产工艺 1、提取法 （1）工艺路线 （2）工艺过程 ①浸泡提取、碱化、中和 自来水室温浸泡2-3h，浸泡液用30%NaOH调pH10-11，静置8h，凝集沉淀多糖类粘性物；虹吸上清液，用1∶1 H2SO4中和至pH6-7，进一步除去胶状物，得中性提取液。 ②浓缩、沉淀 浓缩中性提取液，除去NaCl和胶状物，直到浓缩液含甘露糖30%以上，冷至60-70℃加入2倍体积95%乙醇，搅拌均匀，冷至室温离心收集灰白色松散沉淀物。 ③精制 沉淀物悬于8倍体积95%乙醇中，搅拌回流半小时，冷却过夜，离心得粗品甘露醇，含量70%-80%。重复一次，经乙醇重结晶后，含量＞90%，氯化物含量＜0.5%。重溶于蒸馏水中，加入1/8-1/10活性炭，80℃保温0.5h，滤清。清液冷却至室温得结晶，抽滤，洗涤得精品甘露醇。 ④干燥、包装 结晶甘露醇于105-110℃烘干，冷却、包装。 2、发酵法 （1）工艺路线 （2）工艺过程 ①菌种选育 ②种子培养 ③发酵 ④除杂质、分离结晶 ⑤浓缩、结晶、烘干、包装 3、制剂 （三）检验方法 1、pH值：注射用pH值应为4.5-6.5； 2、含量测定：碘量法测定甘露醇含量。 （四）作用与用途 治疗脑水肿引起的休克、防止肾脏衰竭、治疗青光眼、中毒性肺炎等。 二、1，6 -- 二磷酸果糖 （一）结构与性质 钠盐为白色晶型粉末，易溶于水，4℃较稳定。 （二）生产工艺 1、酶转化工艺 （1）工艺路线 （2）工艺过程 ①取经多代发酵应用过的酵母渣，悬于适量蒸馏水，反复冻融3次，加入底物（8%蔗糖，4%NaH2PO4，30mM MgCl2，pH6.5）于30℃反应6h。 ②除杂蛋白：煮沸5