动物性食品中大肠菌群的检验.pptxVIP

第二节 食品中大肠菌群的检验;一、实验目的;二、基本原理;1、牛天贵主编《食品微生物学实验技术》实验十二 大肠菌群检验 2、GB 4789.3-2010 《大肠菌群计数》 3、大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法 4、美国FDA标准方法（行业标准采用两步法）：用于对出口食品中大肠菌群进行检验 ;;实验操作步骤：;实验所需培养基及作用;1、乳糖胆盐发酵管;2、伊红美蓝琼脂培养基（EMB）;现象及原理 大肠杆菌：菌落深紫色，且有绿色金属光泽； 产酸能力较弱的几种肠道菌：也有相应的棕色； 不发酵乳糖的肠道菌：菌落是无???透明的，比如变形菌属，沙门氏菌属;3、乳糖发酵管;实验操作步骤：;2）乳糖发酵实验 接种1mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内。接种3个稀释度，每一稀释度接种3管，置（36土1)℃温箱内培养（24士2) h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠杆菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 ;3）分离培养 将产气的发酵管分别转接在伊红美蓝琼脂平板上，置（36士1)℃恒温箱内培养18～24 h。取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。 ;4）证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1一2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36士1)℃恒温箱内培养（24士2) h，观察产气情况。凡乳糖产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽袍杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。;;实验报告;;;注： ①本表采用3个稀释度：1ML(g)，0.1mL(g）和0.01 mL (g)。每稀释度3管。 ②表内所列检样量如改用10mL(g)，1mL(g）和0.1mL(g）时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1ML(g), 0.01ML(g）和0.001mL(g）时，则表内数字应相应增加10倍，其余可类推。;表 10毫升、1毫升、0.1毫升检样各接种3管的大肠杆菌最近似数检索表 ;;二、 GB 4789.3-2010 《大肠菌群计数》;第一法：大肠菌群MPN计数法; 需要用到的培养基;（2）BGLB：煌绿乳糖胆盐肉汤 成分：蛋白胨10.0g，乳糖10.0g，牛胆粉溶液200mL，0.1%煌绿水溶液13.3mL，蒸馏水800mL，pH7.2±0.1。 制法：略;抑菌剂的选择;实验步骤及操作要点：;4）初发酵试验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 ;LST结果判断;5）复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 ;;; 三 大肠菌群PetrifilmTM测试纸片法;四、美国FDA标准方法;思考题;一、实验目的;实验所需培养基及作用;注： ①本表采用3个稀释度：1ML(g)，0.1mL(g）和0.01 mL (g)。每稀释度3管。 ②表内所列检样量如改用10mL(g)，1mL(g）和0.1mL(g）时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1ML(g), 0.01ML(g）和0.001mL(g）时，则表内数字应相应增加10倍，其余可类推。;;实验步骤及操作要点：;4）初发酵试验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。