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2021/4/26 血清总胆固醇浓度的测定 【目的】 1.掌握721分光光度计的使用； 2.熟悉比色分析法的基本原理； 【原理】 血清中总胆固醇(TC)包括游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，由过氧化物酶催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比，最大光吸收在505nm [原理] 分光光度计工作原理：物质对不同波长光的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带。当光色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系，即符合朗伯-比耳定律 (Lambert-Beer law)。 T = I/Io A=lg(Io/I)=abc 式中，T为透过率，Io为入射光强度，I为透射光强度，A为消光值(吸光度)，a为吸收系数，b为溶液的光径长度，c为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度而变化的。 [步骤] 1、取干燥试管3支，编号，按下表操作： 混匀后，37℃水浴5 min，立即用分光光度计比色，于505 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度 空白管 标准管 测定管 血清 － － 20μl 标准液 － 20μl － 蒸馏水 20μl － － R试剂 2ml 2ml 2ml 【参考范围】 正常人血清总胆固醇：3.1-5.95 mmol/L(120-230 mg/dl) 血清总胆固醇＝ ×胆固醇标准液浓度 （200 mg/dl） 721分光光度计的使用 1.打开电源开关，预热仪器20 min。 2.选定所需波长，灵敏度档调至1档。 3.打开暗盒盖，调0(用0透光率旋钮将指针调节到透光率0处)。 4.关上暗盒盖，调100%(用100%透光率旋钮将指针调节到透光率100%处)。重复3-4步骤数次，直至指针稳定。 5.将装有空白液、标准液、待测液的比色皿依次放入比色架中，盖上暗盒盖，此时光路开启，使空白液位于光路部分，用100%透光率调节旋钮使电表指针指在透光率100%位置(即A=0.00)。 6.将标准液、待测液分别推入光路，读取吸光度值，读罢将暗盒盖打开。 注意事项：在使用过程中应注意保护比色皿的透光面，避免其受损或产生划痕，影响透光率。 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。*** 10、低头要有勇气，抬头要有低气。**** 11、人总是珍惜为得到。***** 12、人乱于心，不宽余请。**** 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。***** 14、抱最大的希望，作最大的努力。**** 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。***** 16、业余生活要有意义，不要越轨。*** 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。**** 谢谢大家 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。*** 10、低头要有勇气，抬头要有低气。**** 11、人总是珍惜为得到。***** 12、人乱于心，不宽余请。**** 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。***** 14、抱最大的希望，作最大的努力。**** 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。***** 16、业余生活要有意义，不要越轨。*** 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。**** 谢谢大家 9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。*** 10、低头要有勇气，抬头要有低气。**** 11、人总是珍惜为得到。***** 12、人乱于心，不宽余请。**** 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。***** 14、抱最大的希望，作最大的努力。**** 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。***** 16、业余生活要有意义，不要越轨。*** 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。****