如何迎接临床基因诊断实验室验收.pptxVIP

临床基因诊断实验室技术准入的缺陷分析;我国医学实验室管理;PCR实验室技术准入依据和标准;美国NCCLS对NAT的法规(一);美国NCCLS对NAT的法规(二);●物理的: 分区及单向流动、专用移液器、一次性试管架、紫外灯、PCR工作罩、滤芯吸嘴。 ●化学的：dUTP/UNG PCR产物防污染系统、DNA清洁液。 ●方法学的：即时Taqman法，Lab-on-a-chip芯片法，RT PCR一步法。 ●制度和操作规范（维护保养、执行） ;;固 定 移 液 器;易 耗 品;PCR 方法学/防污染;　　扩增中以脱氧尿苷(dUTP)取代脱氧胸苷(dTTP)，扩增产物可被尿苷酶(UNG)消解，在经加热处理，即在脱氧尿苷处断裂，不再能作为模板被扩增。后续扩增进行之前在PCR反应体系中加入UNG处理，在预变性加热后，可能的产物污染即被消除。;实验室分区原则;分区;;;;缺陷二、档案管理;缺陷三、记录;缺陷四、质量控制;PCR检测流程;DNA、RNA的浓度和纯度测定及保存; 1 0D/A260nm=50ug/ml双链DNA 1 0D/A260nm=33ug/ml单链DNA 1 0D/A260nm=40ug/ml RNA DNA总产量（ug）= OD (A260nm)×50ug×稀释倍数×样品总体积 DNA浓度（ug/ml）= OD值(A260nm)×50×稀释倍数 提取RNA总产量（ug）= OD值(A260nm)×40ug×稀释倍数×样品总体积 RNA浓度（ug/ml）= OD值(A260nm)×40×稀释倍数;2、琼脂糖凝胶微型电泳法;3、纯度检查;4、RNA完整性检查;5、DNA、RNA的保存;血清标志物用于疾病诊断、流行病调查;HIV抗体筛查试验流程图 ;肝炎诊断检测路线;英国HBV血清学诊断的SOP(V.SOP6);实验室检测抗-HCV程序;;我们如何选择合适的替代 终点以合理考评疗效?;;HBV DNA清除或抑制？;核酸检测要点; 定量PCR技术;标准品 （Panel）;PCR 定量方法的比较 ;技术要素5.3(14条) -检测仪器;性能、状态评价—校验或检定（物理参数） VERIFICATION-验证、证明、检验、证据—翻译为校验更准确！ 查明和确认计量器具是否符合法定要求的活动，他包括检查、加标志和（或）出具检定证书。 校准-CALIBRATION （校准、标定、标准化、测量的尺度）在规定的条件下，为确定测量仪器（测量系统）所指示的值，与对应的由测量标准所复现的值之间关系的一组操作。;校验周期与内容;;;;需要校验的仪器设备;检测仪器;;（检）测;室内质控;如何确定CT值;如何确定阈值;;阈值线;9.522E+9 1.024E+9 9.433E+7 1.127E+7 1.029E+6 9.902E+4 1.021E+4 9.217E+2 9.276E+1 1.085E+1 H2O;Threshold Cycle Calculation: Baseline cycles Through Threshold Position;标准曲线;室内质控;质控血清; 在开始进行质控时，只需要有3个质控血清测定值即可进行质控。当这组数据扩大到20次有效值时就可以计算RCV的X，s。方法： （1）先将测定值从小到大排列，X1最小，Xn最大； （2）计算X和s； （3）计算SI上限值和下限值。 SI上=（X最小-X）/S， SI下=（X最大-X）/S 对照SI表，检查是否出控， SI上、下限≤规定值，在控； SI上或下限规定值，失控。; SI值表（即刻性质控） N 3 4 5 6 7 8 9 10 11 N(3s) 1.15 1.49 1.75 1.94 2.10 2.22 2.32 2.41 2.48 N (2s)1.15 1.46 1.67 1.82 1.94 2.03 2.11 2.18 2.23 12 13 14 15 16 17 18 19 20 2.55 2.61 2.66 2.71 2.75 2.79 2.82 2.85 2.88 2.2