实验项目：黄酮提取.pptVIP

实验项目：木芙蓉花中有效成份提取与性能研究 ;一、目的与要求;二、实验原理与相关知识;二、实验原理与相关知识;二、实验原理与相关知识;二、实验原理与相关知识;二、实验原理与相关知识;二、实验原理与相关知识;二、实验原理与相关知识;三、仪器与试剂;三、仪器与试剂;四、实验步骤;四、实验步骤;四、实验步骤;四、实验步骤;1.2.2 样品黄酮含量测定 精密吸取提取液1.0 mL于10 mL比色管中，按“各加80 %乙醇至5 mL”起依法进行操作，同时精密吸取黄酮提取液1.0 mL于10 mL比色管中，加80 %乙醇至5 mL，再加1mL水，4 mL4 %NaOH溶液，作样品空白测定吸光度值。按回归方程计算样品黄酮提取得率。;2.多酚测定 2.1 福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂的配制 称取100 g钨酸钠和25 g钼酸钠置于2L的磨口圆底烧瓶中，用700 mL蒸馏水溶解，再缓慢加入50 mL 85 %的磷酸和100 mL的浓盐酸，充分混匀，放入数粒玻璃珠，连接回流冷凝装置，文火回流10 h。用50mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，拆开冷凝管后加入150 g无水硫酸锂和几滴溴水（边加边摇晃），开口继续加热沸腾15 min，使溴水完全挥发为止，终点颜色为黄绿色。冷却后定容至1000 mL，过滤，储存于棕色瓶中，放入冰箱中保存备用。;2.2 制作没食子酸标准曲线 精确称取0.070 g的干燥没食子酸标准品，用蒸馏水溶解，定容于100 mL的容量瓶中，配成浓度为700 mg/L的没食子酸溶液。然后分别精密吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0和4.0 mL没食子酸标准溶液定容于50 mL容量瓶内，配成浓度为0-56 mg/L的系列标准溶液。再从各系列标准溶液中吸取1mL于25 mL比色管内，加10 mL蒸馏水，摇匀，再加1.5 mL Folin- Ciocalteu试剂，充分摇匀，立即加入6 mL 10 % Na2CO3溶液，混匀，加水定容，再混匀，然后在30℃下避光放置反应2 h，以试剂样为空白，在波长760 nm处测定吸光值，以吸光度值为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。;2.3 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu反应比色法 取1mL提取稀释液（样液稀释10倍）于25mL比色管内，加10 mL蒸馏水，摇匀，再加1.5 mL Folin- Ciocalteu试剂，充分摇匀，立即加入6 mL10 % Na2CO3溶液，混匀，加水定容，再混匀，然后在30℃下避光放置反应2 h，以试剂样为空??，在波长760 nm处测定吸光值，根据绘制的标准曲线方程计算提取液中多酚含量(以没食子酸计)，经进一步计算即得多酚提取得率。;3.抑制亚硝化反应 3.1 总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定 分别吸取50 mg/L的NaNO2标准液1.0 mL于6支25 mL比色管中，再分别加入提取液0.0、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL，加入pH3.0 的柠檬酸- 磷酸氢二钠缓冲液10 mL， 37℃条件下反应1h。加入质量分数0.4 % 对氨基苯磺酸2.0 mL，摇匀静置5 min，再加入质量分数0.2% 盐酸萘乙二胺1.0 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀静置15 min。在确定的最大吸收波长λmax = 540 nm 处测定吸光度，并计算总黄酮对亚硝酸钠清除率。;3.2 总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定 分别吸取总黄酮提取液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，于6支25 mL 比色管中。加入pH 3.0 的柠檬酸- 磷酸氢二钠缓冲液10 mL，1 mmol/L 的NaNO2 溶液1.0 mL，1 mmol/L 的二甲胺溶液1.0 mL，用蒸馏水稀释至刻度，在37℃条件下恒温1 h。用移液管吸取1.0mL 上述溶液加到7 cm2 培养皿中，加入质量分数0.5% Na2CO3 溶液0.5 mL，于紫外分析仪(254nm 波长)上辐照15 min。取出后加入质量分数 1% 对氨基苯磺酸1.5 mL，再加入质量分数0.1% 1-萘胺1.5 mL，蒸馏水0.5 mL，摇匀静置15 min。用分光光度计在确定的最大吸收波长λmax = 525 nm 处测吸光度，计算总黄酮对亚硝胺合成阻断率。; 1. 黄酮测定 1.1 黄酮类物质的鉴定方法 (1)盐酸一镁粉反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，产生泡沫反应，反应完后溶液呈橙红色，表明有黄酮类化合物。 (2)氨水反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴氨水振摇，反应完后溶液呈黄色，表明有黄酮类化合物。 (3)硝酸铝反应：取待测液1．0 mL放在测试瓶中，滴加几滴硝酸铝振摇。反应完全后溶液呈黄色，表明有黄酮类化合物