微生物限度检查及控制_王旭.pptxVIP

微生物限度检验及控制;教程目的;1－ GMP检查中常见的缺陷;2. 定义 ;3. 取样及样品处理;如何对批进行取样？ 样品必须具有批代表性： 最易污染的位置取样：批开始、结束及重大故障和调整后 连续性 随机性 上述取样过程要有文件规定和记录;取多少样 （检验数量）? 药典规定检定量是：10克或10毫升 同时要考虑检验损耗和复试;目的 溶解：避免读数时的干扰 匀质：保证检验量 消除抑菌因素：提高检验灵敏度;方法:10ml/g样品，加无菌氯化钠－蛋白胨至100ml, 1小时内使用;要有一个完整的取样计划涵盖??个批生产过程，并要考虑到“最坏情况”以提高检出可能性。 检验数量和检验量应满足药典要求。 样品处理消除干扰、提高灵敏度;我们期望什么? 在整批产品中特定微生物的数量。 我们做的是什么测试? 微生物限度检查是通过目检计数微生物在培养基上生长的菌落数来判断结果。 如何通过检验来证明整批产品的微生物数量（负载）？ 能支持微生物生长并无菌_ 培养基的灵敏度检查。 培养基的保存控制 无抑制微生物生长的因素存在_ 方法验证试验;细菌：营养琼脂培养基，30-35℃ ，培养48小时。 霉菌：玫瑰红钠琼脂培养基，23-28 ℃ ，培养72小时。 酵母：酵母浸出粉胨培养基，23-28 ℃ ，培养72小时;4.2 微生物限度检查用培养基 _灵敏度检查;4.3 微生物限度检查用培养基_ 保存;使用三种微生物培养基 有效控制微生物培养基的保存和效期;5. 微生物限度检查方法;若样品本身的混浊，会干扰计数结果 要考虑对样品中抑菌因素进行中和 0.5％大豆磷脂 4％聚山梨醇酯 由于接种量限制，试验灵敏度受局限 操作简便，设备要求低;操作复杂，设备要求高 不适用于无法溶解的样品 大体积检验量，检验灵敏度不受局限 样品中的抑菌因素可被滤除 中和试剂可应用在淋洗液中，如：?-内酰胺酶 分散剂可作为溶剂，如十四烷酸异丙酯;;TSB培养基中增菌培养2天 金葡菌： 划线甘露醇氯化钠琼脂30－35℃，培养1天。革兰氏染色显微观察。－ 无阳性球菌 大肠、沙门和绿脓： 划线麦康凯琼脂30－35℃，培养1天，革兰氏染色显微观察。－ 无阴性杆菌;方法验证试验 _ 证明在试验条件下没有抑菌作用，如：防腐剂，抗生素，中和剂，表面活性剂，… 下列情况应进行重新验证： 检验方法变更 培养基变更（包括，灭菌参数变更） 产品处方变更 菌种：大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉、控制菌 ;方法验证试验 _ 证明在试验条件下没有抑菌作用，如：防腐剂，抗生素，中和剂，表面活性剂，… 下列情况应进行重新验证： 检验方法变更 培养基变更（包括，灭菌参数变更） 产品处方变更 挑战菌液： 大肠、金葡、枯草，稀释至50-100cfu/ml待用 白念、黑曲霉，稀释至30-80cfu/ml待用;验证方法： 试验组：挑战菌液＋样品制备后进行试验 供试品对照组：样品制备后进行试验 菌液组：挑战菌液进行试验 空白对照组：直接用稀释液进行试验;验证合格标准 细菌、霉菌及酵母菌计数试验 空白对照组无菌生长 菌液组无杂菌生长 （试验组－供试品对照组）÷菌液组?70％ 控制菌检查试验 空白对照组无菌生长 菌液组无杂菌生长 对试验组的菌落鉴定，确认是所接种挑战菌株;报告：（平均计数×稀释倍数） 若在1:10稀释样品中没有检出，报告10cfu/g(ml) 若平均值有小数，应取整数后乘稀释倍数，例如： 1:10稀释样品： 平板1: 1cfu; 平板2：0cfu; 平均为0.5 报告结果是10cfu/ml, 而不是5cfu/ml;结论: 有三种检验方法，但所用培养基、培养温度、时间相同 检验方法应验证证明，在试验条件下没有抑菌效应;培养基: 细菌: 大豆胰蛋白琼脂， 30-35℃ ，培养48小时 霉菌酵母：沙氏葡萄糖， 20-25℃ ，培养5天 ;美国药典：多管法;中国药典中对控制菌检查有类似方法 要考虑对样品中抑菌因素进行中和 0.5％大豆磷脂 4％聚山梨醇酯 由于接种量限制，试验灵敏度受局限 操作复杂，设备要求高 适用于无法溶解的样品;6. 无菌检验;谢谢您的出席;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。5月-215月-21Monday, May 31, 2021 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。18:34:0518:34:0518:345/31/2021 6:34:05 PM 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。5月-2118:34:0518:34May-2131-May-21 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。18:34:0518:34:0518:34Monday, May 31, 202