液相色谱柱的清洗.pdfVIP

芇液相色谱柱的清洗 一、 二、 膆液相色谱柱按基体成分的分类 羂 1、硅胶基体：不键合任何化学基团的为硅胶柱，键合的化学基团有 C18、 C8、C4、氨基、氰基、苯基等。 芈 2、聚合物基体：常见的聚合物基体为聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。 聚合物上再键合化学基团。 羈根据填料基体的成分不同可以分为： 三、 四、 羅色谱柱常见问题的成因 肂 1、硅羟基的死吸附 ：硅胶粒子表面存在硅羟基，这些硅羟基会吸附样品 和流动相中的很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效下降、峰形劣化的现 象。有些吸附是可逆的，可以通过清洗解决。 蚈 2、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面 , 这些 金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物 , 使其被氧化 , 造成峰形劣化。 蒆 3、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲盐溶液，而且分析结束后 , 如 果没有先用水进行冲洗 , 而是直接用纯有机相冲洗 , 瞬间柱子中的微环境是高有 机相、低水相。这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐份 , 将柱子堵塞 , 使柱压 升高 , 柱效下降。 蚃 4、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当 , 使 色谱柱中的保存液全部挥发 , 柱子内部变干 , 造成色谱柱的损伤 , 会影响分离效果。 五、 六、 膂对色谱柱进行适当清洗的意义 聿 以上提到的部分故障可以通过适时、适当的清洗得到解决，恢复色谱柱的功 能，延长色谱柱的使用寿命。 膈 下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗方法进行讨论，具体的冲洗方法 要根据实际情况作适当的选择和调整。当然，不同的用户和色谱产品厂商对自 己的色谱柱会有不尽相同的处理方法。 七、 八、 螆新柱使用前的冲洗 节 新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告 , 了解柱子的性能指标。 分析用的流动相往往与柱子的保存试剂不同 , 故在分析样品之前 , 应使用合适的 试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶 性。 蒀 1、反相柱如岛津 C18、C8等柱保存在 70%甲醇中, 可用 10～20 倍柱体积的 甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流速应缓慢提高 , 如开始 0.3mL/min,10 ～15min 后 可慢慢加快。 薆 2、正相柱或称极性色谱柱一般保存在正庚烷或正己烷中。如果分析时的流 动相含有极性溶剂 , 应使用乙醇或异丙醇冲洗 , 流速 0.1 ～0.3mL/min , 将保存液 冲洗干净后 , 再用流动相平衡。 薅 3、钙柱等糖柱只能用纯水作流动相进行冲洗，有机溶剂会造成色谱柱损坏， 尤其要注意。 芁冲洗后可以记录色谱柱的一些性能指标 , 如柱效、柱压等 , 供今后参考。分析 样品前 , 要用流动相对色谱柱进行平衡 , 待基线平稳后再进样分析。一般用流动 相平衡的时间为 30min, 若系统中有盐或水 , 平衡时间应延长。 九、 十、 袁反相柱日常清洗 莈 色谱柱清洗是日常的重要维护工作。分析工作结束 后 , 要用适当的溶剂清 洗系统中残留的样品。在反相系统中 , 若流动相中无酸、碱、盐类物质 , 可用 甲醇冲洗 30～60min ；若含酸、碱、盐类物质 , 应先用 10 %甲醇, 或用与分析 用流动相相同比例的不含酸、碱、盐的溶液 , 冲洗 30～60min ,