工业菌种的选育及改进.pptxVIP

第三章???工业菌种的选育及改进;尽管生产菌种最初均是来自于自然界，但天然菌种的生产性能一般比较低下。20世纪40年代抗生素工业的兴起，推动了微生物遗传学的快速发展，也为微生物发酵工业优良菌种的人工选育奠定了理论基础。 优良菌种的选育为生产提供了各种类型的突变株，大幅度提高了菌种产生有利用价值代谢产物的水平，还可以改进产品质量，去除不需要的代谢产物或产生新的代谢产物。特别是基因工程、细胞工程和蛋白质工程等较为定向技术的发展，使菌种选育技术不断更??，而研制出众多有价值的微生物工程产品。 自然选育、诱变选育、抗噬菌体菌种的选育、杂交育种、原生质体融合技术、基因工程技术等都被应用于生产菌种的选育。;;第一节自然突变体的筛选（自然选育）; 1、 背景辐射和环境因素的诱变： 不少“自发突变”实质上是由于一些原因不详的低剂量诱变因素的长期综合诱变效应。 例如，充满宇宙的各种短波辐射或高温诱变效应，以及自然界中普遍存在的一些低浓度的诱变物质（在微环境中有时也可能是高浓度）的作用等。 ;2、 微生物自身有害代谢产物的诱变效应： 过氧化氢是普遍存在于微生物体内的一种代谢产物。 过氧化氢对脉胞菌（Neurospora）有诱变作用，这种作用可因同时加入过氧化氢酶而降低； 如果在加入该酶的同时又加入酶抑制剂(KCN)，则又可提高突变率。 这就说明，过氧化氢很可能是“自发突变”中的一种内源性诱变剂。 在许多微生物的陈旧培养物中易出现自发突变（剂），可能也是同样的原因。 ;3、 互变异构效应： 微生物的自发突变可由于本身DNA在复制过程中发生了酮式至烯醇式（或氨基式至亚氨基式）的互变异构效应而引起的。 因为A、T、G、C四种碱基的第六位上如果不是酮基（T、G），就是氨基（C、A），所以有人认为，T和G会以酮式或烯醇式两种互变异构的状态出现，而C和A则会以氨基式或亚氨基式两种互变异构的状态出现。 ;图3.1 由5-BU引起的互变异构效应;A-T;由于平衡一般趋向酮式或氨基式，因此在DNA双链结构中一般总是以A：T和G：C碱基配对的形式出现; 在偶然情况下，T也会以稀有的烯醇式形式出现，因此在DNA复制到达这一位置的瞬间，通过DNA聚合酶的作用，在它的相对位置上就不再出现常规的A而是出现G； 同样，如果C以稀有的亚氨基形式出现在DNA复制到达这一位置的刹那间，则在新合成DNA单链的与C相应的位置上就将是A，而不是往常的G。这或许就是发生相应的自发突变的原因. ;必须说明的是，由于在任何一瞬间，某一碱基是处于酮式或烯醇式，还是氨基式或亚氨式状态，目前还无法预测，所以要预言在某一时间、某一基因发生自发突变仍是不可能的。 但是，人们在运用数学方法对这些偶发事件作大量统计分析后，还是可以发现并掌握其中规律的。例如，据统计，DNA链在每次复制中，每个碱基对错误配对的频率是10-7～10-11，而一个基因平均约含1000bp，故自发突变频率约为10-6。;4、 环出效应：即环状突出效应 有人提出，在DNA的复制过程中，如果其中某一单链上偶然产生一小环，则会因其上的基因越过复制而发生遗传缺失，从而造成自发突变。 ;5、转座效应;1）转座因子（transposable element)定义：位于染色体或质粒上的一段能改变自身位置的DNA序列。广泛分布于原核和真核细胞中。又称“跳跃基因”;(3) 根据分子结构和遗传性质，转座因子可分为3类：;(4) 转座的过程：由转座因子中基因编码的转座酶能识别受体DNA分子中的靶序列（3-12bp），它可先把靶序列切成两条单链，并使转座因子的一条链与靶序列的一条链相连接，另一条链与靶序列相反一端的另一条链相连接。形成的单链缺口可经DNA多聚酶I的作用而合成，再经DNA连接酶的作用而缝合。于是，随着转座因子的插入就使靶序列得到了复制。; 插入突变 (基因失活) 染色体畸变(染色体的缺失\重复和倒位) 转座作用的频率虽然仅为10-5～10-7，但它却是一种自然界所固有的“自发基因工程”或“内源性基因工程”。;三、自然选育在工业生产上的意义;四、自然选育的特点;五、自然选育的方法;第二节诱导突变体的筛选（诱变育种）;二、诱变育种的原理;;二、诱变育种的基本方法;1、 出发菌株的选择;2、 诱变剂的使用方法;;3、诱变剂的剂量选择;三、突变菌株的筛选;第三节 杂交育种; 二、意义; 三、 杂交育种应用 （一）真核微生物的有性杂交 1、 定义： 不同遗传型两性细胞间发生的接合和随之进行的染色体重组，进而产生新遗传型后代的一种育种技术。