流式细胞仪分析技术及应用（64页）.ppt

流式细胞仪分析技术及应用;第一节 概述 一、工作原理 二、散射光的测定 三、荧光测量 四、细胞分选原理;第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 一、淋巴细胞及其亚群的分析 二、淋巴细胞功能分析 三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型 四、肿瘤耐药相关蛋白分析 五、AIDS病检测中的应用 六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析 七、移植免疫中的应用; 流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。 ; 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。 ;;;;采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率； 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性； 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析的精确性。 ; （1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统;9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。*** 10、低头要有勇气，抬头要有低气。**** 11、人总是珍惜为得到。***** 12、人乱于心，不宽余请。**** 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。***** 14、抱最大的希望，作最大的努力。**** 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。***** 16、业余生活要有意义，不要越轨。*** 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。****;;;;;;基本工作原理 ;基本工作原理;; 细胞在液柱中与激光束相交时向周围360°立体角方向散射的光线信号，其强弱与细胞大小、形状、胞内颗粒折射等有关，主要分为前向散射光和侧向散射光。;;FALS Sensor;;;;;荧光信号的放大测定通常使用线性放大器和对数放大器。 线性放大器用于测量信号强度变化范围较少时的信号或代表生物学线性过程的信号。 对数放大器用于测量信号强度变化范围较大且较光谱信号较复杂的信号，在免疫测量中最常使用。 ;目前使用的流式细胞仪至少能用一个激光束检测三色甚至四色激发荧光信号。从而使仪器的检测特异性及精确性进一步提高。 最常用于单克隆抗体标记的三种荧光染料分别是FITC、PE(藻红蛋白)、ECD ，其均能在488nm激光下发出525、575、620nm或675nm的绿色、橙色、橙红色荧光。; 通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行。;;;;;;单参数直方图;;1.双参数直方图点图;2.二维等高图;二维等高图;3. 假三维等高图;（三）三参数散点图;;;;;;;名称;;;;;温度 pH 染料浓度 固定剂 ;;;第四节 在免疫学检验中的应用;;;;;;;小 结;思考题;谢谢大家！;;9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。*** 10、低头要有勇气，抬头要有低气。**** 11、人总是珍惜为得到。***** 12、人乱于心，不宽余请。**** 13、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。***** 14、抱最大的希望，作最大的努力。**** 15、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。***** 16、业余生活要有意义，不要越轨。*** 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。****