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                   铜陵中山医院实验室微生物操 sop 文件  铜陵中山医院实验室微生物操 sop 文件  支原体培养鉴定及药敏操 规程  支原体培养鉴定及药敏操 规程  1. 目的  1. 目的  支原体是缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，也是目前所知能在人工培养基中生长 支原体是缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，也是目前所知能在人工培养基中生长 繁殖的最小微生物，呈多形态性，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，可通过除 繁殖的最小微生物，呈多形态性，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，可通过除 菌滤器。支原体种类繁多，分布广泛，已分离到 150 多种，而人体支原体至少有 菌滤器。支原体种类繁多，分布广泛，已分离到 150 多种，而人体支原体至少有 15 种，其中对人类有致病 用的主要有：肺炎支原体、解脲脲原体、人型支原 15 种，其中对人类有致病 用的主要有：肺炎支原体、解脲脲原体、人型支原 体和生殖道支原体。在这里主要是介绍解脲脲原体和人型支原体的培养检测程 体和生殖道支原体。在这里主要是介绍解脲脲原体和人型支原体的培养检测程 序。  序。  2.范围  2.范围  采集生殖道或尿道标本检测解脲脲原体和人型支原体。适用于尿液、尿道分必物、 采集生殖道或尿道标本检测解脲脲原体和人型支原体。适用于尿液、尿道分必物、 前列腺液、精液和宫颈分泌物等。  前列腺液、精液和宫颈分泌物等。  3.培养程序  3.培养程序  3.1 形态与培养特性  3.1 形态与培养特性  支原体没有细胞壁，形态多形性，但主要有三种基本形态：球形、双球形和丝状。 支原体没有细胞壁，形态多形性，但主要有三种基本形态：球形、双球形和丝状。 革兰染色阴性，但不易着色，姬姆萨染色着色较好，呈淡紫色。支原体营养要求 革兰染色阴性，但不易着色，姬姆萨染色着色较好，呈淡紫色。支原体营养要求 较高，一般以牛心浸液为基础，再添加 10%~20%的动物血清及10%的新鲜酵母浸 较高，一般以牛心浸液为基础，再添加 10%~20%的动物血清及10%的新鲜酵母浸 液。支原体最适pH 为 7.8 ～8.0，低于pH 7.0 则死亡，一般为兼性厌氧菌，个 液。支原体最适pH 为 7.8 ～8.0，低于pH 7.0 则死亡，一般为兼性厌氧菌，个 别菌种为专性厌氧菌。该菌生长缓慢，在支原体培养基中典型菌落呈“油煎蛋” 别菌种为专性厌氧菌。该菌生长缓慢，在支原体培养基中典型菌落呈“油煎蛋” 样，其中以肺炎支原体的菌落最大，解脲脲原体的菌落最小，宜在低倍镜下观察。 样，其中以肺炎支原体的菌落最大，解脲脲原体的菌落最小，宜在低倍镜下观察。 支原体在液体培养基中生长量较少，一般不易浑注。  支原体在液体培养基中生长量较少，一般不易浑注。  3.2程序步骤  3.2程序步骤  3.2.1 标本取样后立即送检，必须在 2h 以内接种，2 ～8℃保存不超过5h，尿液 3.2.1 标本取样后立即送检，必须在 2h 以内接种，2 ～8℃保存不超过5h，尿液 标本应在膀胱内停留2h 以上，新鲜标本取10ml 经 3000r/min 离心15min 对样 标本应在膀胱内停留2h 以上，新鲜标本取10ml 经 3000r/min 离心15min 对样 本进行浓集后取 0.2ml.沉淀进行培养。  本进行浓集后取 0.2ml.沉淀进行培养。  3.2.2 试剂盒放臵至室温后，在编号区标上编号，取出试剂，将稀释液加到培养 3.2.2 试剂盒放臵至室温后，在编号区标上编号，取出试剂，将稀释液加到培养 基干粉瓶的2.9ml 标线处，摇匀待干粉完全溶解后吸 50ul 到C-孔， 为阴性对 基干粉瓶的2.9ml 标线处，摇匀待干粉完全溶解后吸 50ul 到C-孔， 为阴性对 照孔。  照孔。  3.2.3将拭子或样本（尿液或液体标本取离心后的沉淀 0.2ml ）加入培养液中，  3.2.3将拭子或样本（尿液或液体标本取离心后的沉淀 0.2ml ）加入培养液中，  拭子应稍加用力挤压旋转数次，使样本充分溶解于培养液，弃拭子，用移液器分 拭子应稍加用力挤压旋转数次，使样本充分溶解于培养液，弃拭子，用移液器分 别吸50ul 培养液加入余下各孔中，然后每孔滴加二滴无菌液状石蜡，盖上盖，  别吸50ul 培养液加入余下各孔中，然后每孔滴加二滴无菌液状石蜡，盖上盖，  臵 35～37℃孵箱中培养，分别于24h 观察解脲脲原体和 48h 观察人型支原体的 臵