药用酶的生产_S2.pptx

酶的生产方法;第二节 药用酶的生产技术;一、 酶的生物合成及其调节;;Replication 复制：亲代DNA或RNA在一系列酶的作用下，生成与亲代相同的子代DNA或RNA的过程。 Transcription 转录：以DNA为模板，按照碱基配对原则将其所含的遗传信息传给RNA，形成一条与DNA链互补的RNA的过程。 Translation 翻译：亦叫转译，以mRNA为模板，将mRNA的密码解读成蛋白质的AA顺序的过程。 Reverse translation 逆转录：以RNA为模板，在逆转录酶的作用下，生成DNA的过程。;2、RNA的生物合成(转录)- Transcription;转录过程的特点;转录过程;The E. coli RNA polymerase holoenzyme consists of six subunits: a2bb’? s.;;3、蛋白质的合成(翻译)-Translation;蛋白质合成的几个要素(1)-mRNA(模板);蛋白质合成的几个要素(2)-遗传密码;;蛋白质合成的几个要素(3)- 转运RNA;;蛋白质合成的几个要素(4)-核糖体;蛋白质的合成过程;高效率的蛋白质合成体系;4、酶生物合成的调节 (regulation);酶在细胞内的含量取决于酶的合成速度和分解速度。细胞根据自身活动需要，严格控制细胞内各种酶的合理含量，从而对各种生物化学过程进行调控。 酶浓度调节的化学本质是基因表达的调节。在细胞内，所合成的酶的种类及数量是由特殊的基因信息决定的。DNA所携带的酶蛋白遗传信息，需要通过转录和翻译而合成酶蛋白。在细胞内进行的转录或翻译过程都有特定的调节控制机制，其中转录的调控占主导地位。因此，基因表达的调控主要在转录水平上进行。;(1)、原核生物中酶生物合成的调节 (regulation); 结构基因与操纵基因、启动基因一起组成操纵子。原核生物中主要有两种类型：诱导型和阻遏型。 诱导型操纵子：在无诱导物存时，其基因表达水平很低或不表达，只有在诱导物存在的条件下，才能转录生成mRNA，进而合成酶，如乳糖操纵子等。 阻遏型操纵子：在无阻遏物存在下，基因正常表达，当有阻遏物存在时，转录受阻，如色氨酸操纵子等。 另外，启动基因位点上cAMP-CAP复合物的结合与否，亦对酶的生物合成起到调节作用。 转录水平的调节主要有三种模式：分解代谢物阻遏作用、酶合成的诱导作用和酶合成的反馈阻遏作用。;① 分解代谢??阻遏作用 分解代谢物阻遏作用是指某些物质经过分解代 谢产生的产物阻遏某些酶（主要是诱导酶）生物合 成的现象。 原因：易分解物经过分解产生ATP，消耗掉AMP，进而 消耗cAMP，同时腺苷酸环化酶的活化受到抑制而使cAMP 的合成受阻，从而导致cAMP的浓度降低。这必然导致 cAMP-CAP复合物的浓度随之降低，结果启动基因的相应位 点上没有足够的cAMP-CAP复合物结合，RNA聚合酶也就 无法结合到启动基因的相应位点上，转录无法进行，酶的生 物合成受到阻遏。;② 酶合成的诱导作用： 加进某些物质，使酶的生物合成开始或加速进行的过程，称为酶生物合成的诱导作用（简称诱导作用）。; 某些代谢物可以诱导某些酶的合成，是通过促进为 该酶编码的基因的表达而进行的，这种现象叫做酶合成 的诱导。能诱导酶合成的物质叫诱导物。被诱导合成的 酶叫诱导酶。;细菌乳糖操纵子的作用机制(降解物阻遏);乳糖操纵子的结构;③ 酶合成的反馈阻遏作用（又称产物阻遏作用）： 是指酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物使该酶的生物合成受到阻遏的过程。引起反馈阻遏作用的物质称为共阻遏物。; 某些代谢物可以阻止某些酶的合成，是通过阻止 为该酶编码的基因的表达而进行的，这种现象叫做酶 合成的阻遏。能阻遏酶合成的物质叫辅阻遏物。被辅 阻遏物作用而停止合成的酶叫阻遏酶。;调节基因;(2)、真核生物合成的调节 ;二、药用酶生产细胞的选择;(1) 大肠埃希氏杆菌，简称为大肠杆菌，是最为著名的原核生物。;(2) 醋酸杆菌（Acetobacter） ;(3)枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） ;(4) 根霉(Rhizopus) ;(6)曲霉(Aspergillus) ;（二）植物细胞 植物细胞培养主要用于色素、药物、香精、 酶等次生代谢物的生产（参见P190）。;三、药用 酶的生产工艺条件与控制;（一）、药用酶生产的工艺过程;（二）、培养基;1、选择适宜的营养物质 2、营养物的浓度及配比合适 3、物理、化学条件适宜 4、经济节约 5、精心设计