核酸合成转录.pptxVIP

14.1 转录(transcription)的特点： 1、以DNA单链为模板，NTP为原料，在DNA依赖的RNA聚合酶催化下合成RNA链的过程。 转录的条件： ; DNA的大小与基因 结构基因(structure gene)： DNA分子中能转录出RNA的区段 1、重复 2、重叠 3、不连续 ;2、 DNA的不对称转录  .DNA双链上，仅一股链转录，另一股不转录。;模板链：反意义链（antisense strand，(-)链）—— 以该链中的DNA碱基顺序指导RNA的合成即被转录的那条DNA链。;5’-----GCAGTACATGTC-----3’编码链 DNA 3’-----CGTCATGTACAG-----5’模板链 5’-----GCAGUACAUGUC-----3’ mRNA N ------Ala--Val--His--Val------C 蛋白质; 3、RNA聚合酶——依赖DNA的RNA聚合酶（DNA-dependent RNA polymerase,DDRP）; 14.2.1 大肠杆菌RNA聚合酶的组成 （1）全酶(holoenzyme) 由4种(5个)亚基α2ββ’σ组成 （2）核心酶(core enzyme) α2ββ’ ，参与转录的全过程 （3）σ亚基（起始亚基） 亦称σ因子（σ factor)—转录辅助因子 识别启动子 ω亚基功能未知;大肠杆菌RNA聚合酶的结构示意图;全 酶 核 心 酶 ;第10页/共52页;14.2.2 原核生物的启动子（promoter）1、启动子 RNA聚合酶全酶识别、结合、开始转录的DNA序列（双链） 转录因子RNA聚合酶起始转录所需要的辅助因子（蛋白质）; 原核生物启动子的特点:(1)DNA序列在转录起始点的5’端区(上游区)(2)-10bp处 -TATAAT- (Pribnow box)(3)-35bp处 -TTGACA-;14.2.3 原核生物RNA的转录过程 14.2.3.1 模板的识别;14.2.3.2 原核生物的转录起始;; RNA聚合酶σ因子 识别及结合启动子，延长时脱落 不参与转录过程，是转录辅助因子 识别位点：启动子-35区、-10区;结合过程： 闭和的启动子复合体 RNA聚合酶（全酶）中的σ因子在DNA双链 上迅速、随机滑动，寻找到启动子-35区， 形成疏松的复合物，DNA双链未解开。 开放的启动子复合体 RNA聚合酶（全酶）移向-10区和转录起始 ;14.2.3.3 延长---- 转录泡RNA聚合酶（核心酶）　◆与DNA模板紧密结合，沿3’ 5’方向移动　◆解旋作用：DNA解开　◆聚合功能（不具外切酶功能） ??交螺旋 ◆ RNA-DNA形成杂交螺旋 ◆ 转录产物RNA沿5’ 3’方向延长;第19页/共52页;第20页/共52页;See Movie ;14.2.3.4 转录终止：终止子和终止因子   转录至模板某一位置 停止形成磷酸二酯键  RNA—DNA杂交链解开 DNA解链的部分重新形成双螺旋 RNA聚合酶离开DNA;终止子（terminator） ——提供转录终止信号的DNA序列 终止因子（termination factor） ——协助RNA Pol识别终止信号的辅助因子 ;第24页/共52页;第一类：依赖ρ-因子的终止;第26页/共52页; DNA模板上有终止信号  转录出来的RNA Pol遇此结构停止工作 DNA和RNA（dA ：rU） 稳定性下降;;;;第31页/共52页;起始;14.2.4 转录后的加工;14.2.4.1 原核生物mRNA 多顺反子 转录与翻译同步 mRNA不需加工 寿命短 ;14.2.4 .1tRNA的加工;第36页/共52页;14.2.4 .3 rRNA的加工;RNaseⅢ; 14.3 真核细胞中的转录 1、 转录与翻译在异处;14.3.1 真核细胞RNA聚合酶 在DEAE-Sephadex柱上的洗脱次序称为酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ ;14.3.2 启动子 （Hongness盒 –25）;4、真核与原核生物mRNA的区别; 真核生物的mRNA转录后加工;加帽 加尾 mRNA前体的剪接;5? pppGp…;;;mRNA-DNA hybrids for the chicken ovalbumin gene (the R