N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书..docx

精品文档 精品文档 PAGE PAGE5 精品文档 PAGE N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)试剂盒使用说明书 (酶法·液体双试剂 ) 用 途 本试剂盒用以测定尿液中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG)的活力。 原 理 在第一反响中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响， 在第二反响中，NAG作 用于基质 P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成 N-乙酰氨基葡萄糖，此 N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成 H2O2。此H2O2在过氧 化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔 3-双(4-氯酚)甲基-4-?二甲氨苯基〕胺(BCMA)反 应，生成绿色色素。经过测定此色素可求得 NAG的活力。 第一反响： HK 葡萄糖+ATP─────────→ 葡萄糖-6-磷酸+ADP 第二反响： NAG PNP-NAG+H2O──────→N-乙酰氨基葡萄糖 +p-硝基苯酚 NAGOD N-乙酰氨基葡萄糖 +O2+H2O───→N-乙酰氨基葡萄糖酸 +H2O2 H2O2+BCMA+H+ POD ────→绿色色素+2H2O 试 剂 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 试剂 成 份 含 量 ────────────────────────────────── R-1A1(冻干) NAGOD ≥3000U/L POD ≥12500U/L HK ≥8000U/L ATP·2Na ≥5mg/ml R-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/L R-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L ────────────────────────────────── R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/L R-2B MES 30mmol/L ────────────────────────────────── 标准酶 NAG 约为50U/L 标准酶溶解液 MES 30mmol/L ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 标 本 尿液 试剂配制 R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。溶解后，低温避光保留(2-8℃)可稳定二周。 R-2：以一瓶 R-2B溶解一瓶 R-2A。溶解后，低温避光保留 (2-8℃)可稳定二周。 标准酶溶液：吸取 5.00ml标准酶溶解液溶解一瓶标准酶。 测定方法 剖析方法：速率 A；主波长：750nm；副波长：600nm（可不用）；样品量：4.0ul；R-1： 240ul，R-2：120ul；校准方式：线性；反响方向：上升；测定温度： 37℃。 样品与R-1混匀后反响 5分钟，加入 R-2混淆后延迟 157秒，测定125秒。 样品 4.0ul 主波长750nm R-1 240ul R-2120ul 副波长600nm 测光 测光 0 5 7 10min 计 算 As/min NAG(U/L)= ━━━━━━×标准酶标示值 Astd/min As/min= 测定管的吸光度变化量 Astd/min= 标准管的吸光度变化量 计算实例 采用日立7020型自动剖析仪测得测定管的A/min为0.105，标准管的A/min（标准酶的含量为51.7U/L）为0.153,则 0.105 NAG(U/L)= ━━━━━━━× 51.7=35.5 0.153 参照范围 尿液：1.1-11.9U/L 建议各实验室成立自己的正常值参照范围 注意事项 正常浓度的胆红素、抗坏血酸等复原物质对测定无影响。异样高浓度时会致使负的误 差。 2.高浓度的尿糖会致使正的误差。尿糖异样高值时请将样品稀释至尿糖≤ 7g/dl后测定。 备有各样自动剖析仪的参数可供参照。试剂性能 1. 灵敏度：以纯水为样品测准时的吸光度为 0.000-0.050；以50U/L的标准酶溶液为样 品测准时，吸光度为0.140-0.160。 2. 线性范围：0-125U/L。 3. 精细度：n=5，CV5％。 4. 正确性：测定定值质量控制物时，测得值在定值± 2SD的范围以内。 有关：r=0.999,y=1.231x+0.411(y：本法，x：CPR-NAG法)。 储藏及稳定性 本试剂盒在2-8℃避光保留可稳定一年；试剂R-1、R-2配制后在2-8℃避光保留可稳定二周。 临床意义 NAG是肾小管损害的标记物， 尿NAG活性升高是肾脏损害的较敏感指标。 NAG活性可 用于肾小管间质性肾炎、尿路传染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反响 和肾病综合症的早期诊疗。上述疾病时 NAG活性的升高均早于其他相应指标，有利于疾病的 早期发现和实时治疗。NAG活性还可用于重金属等肾毒性物质环