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第 1 讲 基因工程和细胞工程
[考纲要求 ] 1.基因工程的诞生 ( Ⅰ)。2. 基因工程的原理及技术 (含 PCR 技术 )( Ⅱ)。3.基因工
程的应用 ( Ⅱ) 。4. 蛋白质工程 ( Ⅰ)。5. 植物的组织培养 ( Ⅱ) 。6. 动物细胞培养与体细胞克隆 ( Ⅱ)。
7. 细胞融合与单克隆抗体 ( Ⅱ)。8.实验: DNA 的粗提取与鉴定。
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千里之行 始于足下
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1 .基因工程
(1) 基因工程的 3 种基本工具
①限制性核酸内切酶:识别特定核苷酸序列,并在特定位点上切割 DNA 分子。
② DNA 连接酶: a. Ecoli· DNA 连接酶只能连接黏性末端; b.T 4 DNA 连接酶能连接黏性末端
和平末端。
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千里之行 始于足下
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③载体:需具备的条件包括: a.能在宿主细胞内稳定存在并大量复制; b. 有一个至多个限制
酶切割位点; c.具有特殊的标记基因,以便对含目的基因的受体细胞进行筛选。
(2) 获取目的基因的途径:①从基因文库中获取;②利用 PCR 技术扩增;③化学方法直接人
工合成。
(3) 基因表达载体的组成:启动子、目的基因、终止子及标记基因等。
(4) 将目的基因导入受体细胞
①植物:体细胞或受精卵——常用农杆菌转化法 (双子叶植物和裸子植物 ) 、花粉管通道法、
基因枪法 (单子叶植物 )。
②动物:受精卵——显微注射技术。
③微生物:细菌 (常用大肠杆菌 )——感受态细胞法 (钙离子处理法 ) 。
(5) 目的基因的检测与鉴定方法
①检测目的基因是否插入转基因生物的 DNA 上: DNA 分子杂交技术。
②检测目的基因是否转录出 mRNA :分子杂交技术。
③检测目的基因是否翻译成蛋白质:抗原—抗体杂交技术。
④个体生物学水平鉴定:根据表达性状判断。
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易 混 辨 析
①限制酶≠ DNA酶≠解旋酶
限制酶的作用是识别双链 DNA 分子上某种特定的核苷酸序列,并使两条链在特定的位置断
开; DNA 酶的作用是将 DNA 水解为基本组成单位;解旋酶的作用是将 DNA 两条链间的氢
键打开形成两条单链。
② DNA 连接酶≠ DNA聚合酶
DNA 连接酶能连接两个 DNA 片段,而 DNA
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