《茶树育种学》第7章生物技术育种.ppt

培养细胞的密度及活力的测定 （1）起始培养的细胞密度 植板率用来反应植板效率的高低，其含义是每个平板接种细胞总数形成细胞团的百分率 单离细胞并不全是活的，细胞活力测定有助于评价细胞质量，同时对以后的培养效率也有较正确的估计 （3）植板率的测定 （2）细胞的活力测定 细胞突变体筛选 细胞突变体筛选的一般技术 ? （1）细胞材料的选择 c. 选用生长速度相对较快的细胞系 需注意三方面问题： a. 起始材料要较易再生植株 b. 选用染色体数稳定的材料 （2）诱发突变体的方法 物理诱变：如紫外线、放射线等 化学诱变： 化学诱变剂，包括甲基磺酸乙酯（EMS）、天然碱基类似物和吖啶类物质等 （3）突变细胞的选择方法 直接选择法（正选择法）： 间接选择法： 将大量细胞置于有选择剂的培养基上，使正常细胞不能生长，而抗选择条件的突变细胞能够生长，从而达到选择的目的 用于难以或不能用直接选择法分离的突变型 突变性状的遗传基础及其稳定性鉴定 ? 鉴别经选择出来的细胞是否为突变细胞，常用的方法是除去选择剂，让细胞或组织在没有选择剂的培养基上继代培养几代。如果仍能表现选择出来的变异性状的，便可基本确认为突变细胞或组织。 鉴别变异细胞及组织再分化形成的植株是否为突变植株时，可用再生的植株开花结实后所获得的发芽种子或用种子长成的植株为材料，进一步诱导其形成愈伤组织，将这些愈伤组织转移到含有选择剂的培养基上进行培养，如果仍能表现变异性状的，即可认为这些再生植株为突变植株。如果所选择的突变性状是可以在植株个体水平表达的性状时，例如抗病性等，也可以用再生植株本身进行鉴定。 农业上有用性状的突变体离体筛选 ? （1）抗性突变体 抗病性常用的选择剂：活菌选择剂和病菌毒素选择剂 抗除草剂和抗寒性 （2）育性突变体 （3）营养缺陷型突变体 （4）各种形态特征和生物学特性突变体 植物原生质体： ? 第四节 原生质体培养与体细胞杂交 原生质体融合（细胞杂交）： ? 指除去细胞壁由质膜包裹着的具有生活力的植物裸细胞。它含有该个体的全部遗传信息，而且具有再生出与其亲本完全相同个体的潜力。 使不同植物的原生质体互相融合形成杂种细胞，再经过人工培养诱导杂种细胞分化形成植株的过程 原生质体的分离 用叶片分离原生质体时，选用成熟叶片或生理活性稍微衰退的过熟叶，有利原生质体的分离以及培养再生植株。试管苗的子叶、胚轴以及培养的悬浮细胞，具有无菌、不受生长季节影响等特点。 （一）分离原生质体的材料 从植物的各个部位几乎均能分离出原生质体。 最常用的是叶肉组织、无菌苗的子叶以及由植物组织器官形成的愈伤组织及悬浮细胞。 预处理的方法： （二）原生质体的分离 （1）材料的预处理 提高原生质体的产量和代谢活力； 逐步降低植物细胞水势，增强原生质体对培养基高渗透压的适应； 使游离的原生质体更能适应新的培养条件 目的： 预培养 暗处理 药物或添加剂处理 萎蔫处理 更新培养基 目前一般采用酶法。常使用商品化的酶制剂，其中包括纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶。 （2）原生质体的分离 在配制酶液时，必须加入适量的渗透压稳定剂，保持一定的渗透压，以代替细胞壁对原生质体起保护作用。因为细胞壁一旦被去掉，裸露的原生质体若处于内外渗透压不同的溶液中将可能立即破裂。甘露醇和山犁醇是常用的渗透压稳定剂，有时也用葡萄糖。 酶液的pH对原生质体产量和活力有很大影响 原生质体的培养 （一）培养基及培养条件 植物激素 光照和温度 原生质体的密度 2,4-D是用于原生质体培养的最普遍的生长调节剂，而细胞分裂素对诱导原生质体细胞的分裂是不需要的。 一般采用103个/ml以上的密度。 培养的原生质体一开始应在黑暗中培养，叶肉原生质体再生初期以散射光为宜。当原生质体再生成愈伤组织时，需要强光照。 （二）原生质体的培养方法 单细胞培养的各种方法均适用原生质体的培养，其中最常用的是液体浅层培养和平板培养两种方法。 细胞分裂 细胞壁再生 分为三个阶段： （三）原生质体的培养过程 植株再生 原生质体的融合 （一）原生质体融合的类型 自发融合 诱导融合 指植物组织和细胞在用酶分离原生质体过程中同种原生质体自然融合，形成同核体。这对于以植物育种为目的的体细胞杂交而言，是没有应用价值的。 指分离原生质体以后，通过加入诱导剂或其他方法促进不同亲本的异种原生质体之间发生融合的过程。诱导融合可以在两种（包括种内，种间、属间、科间甚至界间）原生质体之间进行。 （二）原生质体融合的方式 对称融合 非对称融合 指种内和种间完整原生质体的融合，可产生核与核、胞质与胞质间重组的对称杂种，并可发育为遗传稳定