《茶树育种学》第8章分子育种.ppt

（2）化学和物理法诱导DNA直接转化 不依赖载体和其他生物媒体，将特殊处理的裸露DNA直接导入植物细胞实现基因转化的技术。 a. 聚乙二醇法 b. 脂质体法 c. 电击法 d. 超声波法 e. 显微注射法 f. 激光微束法 g. 基因枪法 （3）种质系统介导的基因转化（生物媒体转化系统） 是外源DNA借助生物自身的种质细胞为媒体，特别是植物的生殖系统的细胞（花粉、卵细胞、子房、幼胚等）以及细胞结构来实现转化目的， 特点： a. 转化的DNA可以是裸露的，也可以重组在质粒DNA上 b. 转化过程不依靠物理化学过程，而是依靠生物自身的种质系统或细胞结构功能来实现 c. 植物整体水平上的转化 d. 方法简便易行，并与常规育种紧密结合 e. 不需要植物组织、细胞、原生质体等离体培养过程 方法： A. 花粉管通道法 使外源DNA沿着花粉管渗入，经过珠心通道进入胚囊，转化尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞。尽管已经通过这一技术培育出多种植物的新品种，但有许多理论问题没有得到圆满的解释。 B. 生殖细胞浸泡法 C. 胚囊、子房注射法 将供试外植体如种子、胚、胚珠、子房、花粉粒等直接浸泡在外源DNA溶液中，利用渗透作用把外源基因导入受体细胞，整合并稳定地表达与遗传。 使用显微注射仪把外源DNA溶液注入到子房或胚囊中，由于子房或胚囊中产生高的压力及卵细胞的吸收，使外源DNA进入受精的卵细胞中，从而获得转基因植株。 转基因植株的鉴定 转基因植物的证据应有以下几点： ? （2）转化当代要提供外源基因整合和表达的分子生物学证据，物理数据（Southern杂交、Northern杂交、Western杂交等）与表型数据（酶活力分析或其他） （1）要有严格的对照（包括阳性及阴性对照） （3）提供外源基因控制的表型性状证据（如抗虫、抗病等） （4）根据该植物的繁殖方式提供遗传证据，有性繁殖需有目的基因控制的表型性状传递给后代的证据，无性繁殖需有繁殖一代稳定遗传的证据。 基因工程的安全性评价 安全性评价的意义 转基因植物安全性评价 生物安全评价的核心是安全性平均和风险评估 对生物安全的管理必须在保障人类健康和环境安全的同时推动生物技术的发展，使之为人类创造最大的利益 生物安全政策与法规的目的就是使这两个目标达到高度的和谐。 农业部有专门的转基因植物的《管理办法》 转基因植物各阶段安全性评价申报要求 （1）中间试验的报告： （2）环境释放的申报 （3）生产性试验的申报 （4）安全证书的申报 包括项目名称、试验转基因植物材料数量、试验地点和规模、试验年限。 第二节 分子标记与育种 借助与目标基因紧密连锁的遗传标记基因的基因型分析，鉴定分离群体中含有目标基因的个体，以提高选择效率，即采用标记辅助选择手段，减少育种过程中的盲目性，加快育种的进程，这就是分子标记辅助育种。 遗传标记是基因型特殊的易于识别的表现形式，遗传学中通常将可识别的等位基因称为遗传标记，用来研究基因的遗传和变异规律。 常用分子标记的原理和方法 遗传标记分为形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记四种类型。 DNA分析技术主要是针对部分DNA进行的，分子标记是基因DNA水平多态性的遗传标记，它通过检测基因组的一批识别位点来估测基因组的变异性和多样性。 DNA分子标记的特点： （1）在DNA水平上对遗传变异的直接反映 多态性高，存在许多等位变异，不需专门创造特殊的遗传材料，数量极多，遍及整个基因组，远远超出表型标记的局限 （2） 大多数分子标记是共显性的，使对隐性性状的选择成为可能，鉴别出纯合基因型和杂合基因型，提供完整的遗传信息。 （3） RFLP（限制性片段长度多态性）标记 以生物基因组DNA序列变异为基础，研究不同基因组间差异的一种技术。 基因组DNA之所以有限制性片段长度多态性，是因为生物体在长期进化过程中，种属间甚至品种间由于突变、重组等基因，在限制性内切酶位点上发生核苷酸的插入、缺失和点突变（使原酶切位点消失或产生新酶切位点）。 当用限制性内切酶处理不同生物体的DNA时，酶切所产生的DNA片段其长度可能不相同，这种酶切后DNA片段长度的差异就是RFLP。 RAPD （随机扩增片段多态性）标记 建立在DNA序列体外酶促扩增的多聚酶链式反应（PCR）的基础上的RAPD标记，其基本原理是采用人工合成的较短的随机排列碱基顺序核酸单链（通常为10个核苷酸）为引物，在一种热稳定DNA多