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GB4789.40-2010食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验 杨小蓉 主要内容 第一部分 概述 第二部分 GB/T4789.40-2008和GB 4789.40-2010 系列标准检验方法比较 第三部分 GB 4789.40-2010 检验方法讲解 第一部分 概述 生化反应 致病性 （一）易感人群:婴儿 脑膜炎、坏死性小肠结肠炎、菌血症 （二）主要感染渠道 《婴儿配方食品》 《特殊医学用途配方食品》 2004年2月FAO/WHO在日内瓦召开的ES专家研讨会中：ES列为PIF中仅有的两种A类致病菌（沙门和阪崎）之一。 第二部分 GB/T4789.40-2008和GB 4789.40-2010 系列标准检验方法比较 标准的变更状况 设备及试剂的变更 第三部分 GB 4789.40-2010 检验方法讲解 阪崎肠杆菌检验 GB 4789.40-2010 发布日期 2010.03.26 实施日期 2010.06.01 实施之日起代替GB /T 4789.40-2003 阪崎肠杆菌检验程序 检验步骤 步骤1 前增菌和增菌 步骤2 分离 步骤3 生化鉴定 步骤1—前增菌和增菌 前增菌： 　样品100g(或100ml)，至44℃900ml BPW中，均质，36 ℃ ±1 ℃，培养18h ±2h。 选择性增菌： 　吸取增菌液1ml转种于10ml mLST-Vm肉汤(改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素)， 44 ℃ ±0.5 ℃，培养24h ±2h。 mLST-Vm介绍 mLST-Vm，改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素肉汤 即在改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤LST中另加入适量的NaCl和Vm 。 研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门菌属、大肠埃希氏菌等）相比，ES具有较高的耐渗透压能力。加入0.5 M 的NaCl在保证ES良好生长的同时，可以有效地抑制上述其他细菌的生长。 Vm可有效地抑制G+菌的生长。 44 ℃的生长温度可以进一步抑制其他细菌的生长。 步骤2—分离 取mLST-Vm培养物，划线接种阪崎肠杆菌显色培养基， 36 ℃ ±1 ℃，培养24h ±2h 挑取1-5个可疑菌落，接种TAS平板(胰蛋白胨大豆琼脂)25 ℃ ±1 ℃ ，培养48h ±4h，观察黄色菌落 DFI琼脂平板 DFI琼脂平板 DFI琼脂平板 黄色色素—TSA琼脂平板 步骤3—鉴定 挑取TAS平板黄色菌落，进行生化鉴定。 可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统 商业化鉴定系统 在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的 API 20E Vitek GNI+。 报告 每100g(或ml)样品中检出或未检出阪崎肠杆菌 第二法 阪崎肠杆菌的计数 MPN法 步 骤 步骤１ 　样品100g(或100ml)、10 (或100ml) 、1 (或100ml) 各三份，分别至预热到44℃900ml、 90ml 、9ml BPW中，均质，36 ℃ ±1 ℃，培养18h ±2h。 步骤２ 　分别吸取1ml转种于10ml mLST-Vm肉汤， 44 ℃ ±0.5 ℃，培养24h ±2h。 步骤３ 　分离鉴定：同第一法 报告 根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查MPN检索表，报告每100g(或ml)样品中阪崎肠杆菌的MPN 值。 谢 谢 * * 1980年之前称为黄色阴沟肠杆菌，经DNA-DNA杂交、生化反应、黄色素、抗生素敏感性， 1980命名为阪崎肠杆菌 * 注：＋ ：90-100％；(＋) ：75-89%； V ：25-74％；(－)：10 -24％；－ ：0-9％ GB/T4789.40-2008食品卫生微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 2008.11.21分布 2009.03.01实施 GB 4789.40-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 2010.06.01实施 阪崎显色培养基，删除DFI显色培养基（A.3） DFI琼脂 培养基 生化鉴定试剂盒 API20E生化鉴定试剂盒 商品化生化 全自动微生物鉴定系统 VITEK全自动微生物鉴定系统 仪器 2010 2008 报 告 生化鉴定 挑取黄色菌落 阪崎肠杆菌显色培养基 36℃±1℃，24 h±2h 挑取可疑菌落 1mL + mLST-Vm 10mL 44℃±0.5℃，24 h±2h 检样 100 g(ml)+BPW稀释液 900