第11章组织培养.pptxVIP

第三篇 植物细胞工程;第11章 植物组织培养;植物组织培养概念;植物组织培养与细胞培养的区别;发展历史;;;;植物组织培养的理论基础;;;植物细胞的全能性;;;植物细胞全能性的表达;;;;细胞和组织分化与脱分化的区别;;;;甘蓝;离体的植物器官、组织、细胞;影响细胞脱分化与再分化的因素 ;;;植物组织培养特点;;;植物组织培养;培养基的种类;;;;;水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质。它是生命活动过程中不可缺少的物质。 配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏???程发霉变质。 大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。 ;无机元素;;;;微量元素：指小于0.5mmol／L的元素，Fe，B，Mn，Cu，Mo，Co等。 铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。在制做培养基时，用Fe·7H20和Na2—EDTA结合成螯合物使用。 B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。 ;有机化合物;碳水化合物 最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。 蔗糖使用浓度在2%—3%，常用3%，但在胚培养时采用4%-15%的高浓度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。 不同糖类对生长的影响不同。从水稻根的培养来看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相当，麦芽糖差一些。 高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时要给予考虑。; 维生素(vitamin) 在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。 植物细胞在培养中通常需加入一至数种维生素。主要有VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸），有时还使用生物素、叶酸、VB12等。一般用量为0.1—1.0mg／L。 VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，VB6能促进根的生长，Vpp与植物代谢和胚的发育有一定关系。;肌醇: 又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 通常可由磷酸葡萄糖转化而成，还可进一步生成果胶物质，用于构建细胞壁。 肌醇与6分子磷酸残基相结合形成植酸，植酸可进一步形成磷脂，参与细胞膜的构建。 使用浓度一般为lOOmg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用。;氨基酸 是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白。;天然复合物;;;植物生长调节物;生长素类(auxin) 生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，就可促进根的生长，其次是茎和芽。组织培养中常用人工合成的生长素类物质。 IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。;;细胞分裂素类 ( cytokinin ) 这类激素是腺嘌吟的衍生物，包括6—BA(6—苄基氨基嘌呤)、Kt (kinetin 激动素)、Zt (zeatin 玉米素)等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6—BA。 在培养基中添加细胞分裂素有三个作用： ①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 ②促进细胞分裂。 ③抑制根的分化。 因此，多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖，而在生根培养时使用较少。;赤霉素类( gibberellic acid，GA) 有20多种，培养基中添加的是GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长生长，促进不定胚发育成小植株； 赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时，有利于木质部分化；比值低时，有利于韧皮部分化； 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。 ;激素配比模式;;;No BAP? ;NAA increased to 5.0 mg. l-1 Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus ;培养材料的支持物 ;;抗生物质;活性炭;活性炭的应用;;培养基的选择;单因子试验;;2种激素5种浓