荧光定量pcr技术临床应用.pptxVIP

荧光定量PCR技术在临床医学研究中的应用及注意事项内 容 提 要一、基因诊断技术在医学检验中的地位二、荧光探针定量PCR在临床医学中的应用三、荧光探针定量PCR在临床医学中的主要问题细胞膜细胞核DNA基因诊断的物质基础及与其它诊断方法的区别基因诊断转录 mRNA翻译蛋白质免疫学诊断生化诊断临床诊断临床表现临床实验医学发展 三个时代 标志技术 性质生化诊断时代 生化分析 表象免疫学诊断时代 酶免、放免 表象分子(基因)诊断时代 基因体外扩增(PCR)本质荧光定量PCR在临床医学中的应用1、病原体的定量检测及药物疗效考评（HBV）2、肿瘤基因和肿瘤标志物表达(mRNA)的检测（P53 ）3、遗传病基因的检测（地中海贫血 ）4、与疾病相关的各种蛋白质的基因表达的定量检测6、建立病原体的分子诊断标准荧光定量PCR在病原体检测中的应用一、肝炎病毒定量检测二、性病病原体检测三、优生优育相关项目检测四、结核杆菌及呼吸道病原体检测五、其他病原体检测病毒性肝炎概况病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起，以肝脏炎症和坏死病变为主的一组传染病。按病毒的生物学特征、临床和流行病学特征，1989年在日本东京的国际肝炎学术讨论会上，将其分为甲（A）型、乙（B）型、（C）型、丁（D）型、戊（E）型肝炎，以后还报道了己（F）型和庚（G）型。 我国是个肝炎大国，病毒性肝炎发病数位居法定管理传染病的第一位，仅乙型肝炎病毒感染者就达1.2亿，每年新增加的感染者也在百万以上，丙肝发病率亦趋上升。慢性乙型肝炎病程迁延，如得不到及时的治疗，部分将会发展为肝硬化甚至肝癌，严重危害人类健康。HBV基因型与血清型关系及流行病学分布基因型血清学亚型基因长度(nt)临床突变率主要流行地域PC*(G1896A)BCP**(1762/1764)Badw2ayw1321550％（常）T185816％东南亚、中国、日本Cayr;adrq+;Adrq-;adr;adw2321550％（常）T1858或C185858％（常）东南亚、中国、日本、澳洲、美国病原学乙型肝炎检测标志物HBsAg，抗-HBsHBeAg，抗-Hbe抗HBcHBV-DNA乙型肝炎免疫检测和PCR结果异同“大三阳” PCR结果阴性抗-HBs阳性，PCR结果阳性荧光定量PCR技术对性传播疾病的检测一、淋球菌（NGH）二、沙眼衣原体、解脲脲原体（CT、UU）(有证）三、梅毒螺旋体（TP）四、单纯庖疹病毒（HSV）五、乳头瘤病毒（HPV）（有证）六、人类免疫缺陷病毒（HIV）PCR技术对性传播疾病检测的注意事项1标本的选取 TP HSV 2临床疗效考评 超高倍荧光定量PCR诊断TORCH综合征传统的TORCH病原体：TOX, other, RV, CMV, HSV新近发现的TORCH：麻疹V、腮腺炎V、水痘—带状 庖疹V、肠道V、乙肝V、丙肝V、 HPV、EBV、HIV、人庖疹V6、 人微小病毒B19等TORCH感染的实验室诊断一、组织培养：慢，费力，阳性率低二、血清学诊断： IgG：IgM： 1、不能定量分析 2、抗体的产生受多种因素的影响 3、产生假阳性三、基因诊断方法 原理：检测TORCH病原体的核酸 优点：1、客观指标 2、敏感性、特异性高 3、定量指标 荧光定量PCR在TORCH诊断中的应用： 1、筛选TORCH的患者 2、建立TORCH的分子诊断标准荧光定量PCR技术检测TOX孕妇TOX感染的危害 孕早期（3月）25%感染胎儿，后期65%感染胎儿 但早期感染危害严重易感人群 1、吃生或未熟的含有囊虫或囊虫卵的肉类 2、从事动物尸体、皮毛等工作孕妇 3、饲养宠物，如猫、狗者荧光定量PCR技术检测HCMV人群自然感染率达到60—80%，可通过胎盘、产道、母乳传染初次感染HCMV的孕妇传染胎儿的危险性15——50%再次感染仅为0.5%—2.5%注意事项缺乏分子诊断标准辅助指标荧光定量PCR技术检测21三体综合征 孕妇外周血中有胎儿的少量细胞 通过PCR技术检测孕妇外周血中的胎儿细胞荧光定量PCR技术用于性别鉴定 荧光定量PCR检测SRY基因 SRY基因，雄性的性别决定基因，指Y染色体上具体决定生物雄性性别的基因片段 科研应用不提供商业试剂EB病毒载量与鼻咽癌 血浆EBV载量与鼻咽癌显著相关 鼻咽癌病人血浆EBV与肿瘤复发相关 10个复发病人：32，250copies/ml 15个二年持续缓解病人：0 copies/ml 17个随访病人：临床恶化前6月显著升高 荧光定量PCR技术用于肺部感染的诊断一、肺炎支原体的检测二、结核杆菌的检测