转化的原理及步骤.pptxVIP

为什么需要质粒转化 放大某一基因 片 段 ， 用于探针、 基因功能检测等。 携带目的基因的重组质粒在大肠杆茵中进行表达。 PCR产物的克隆和测序。 构建基因库、cDNA库等。 5. 纯化基因片段 实验原 理 关于载 体 质粒 质粒是一类双链、闭环的DNA 分子， 存 在 于细茵体 中， 独 立 于细 茵染 色体 之 外进行复制和遗传的耕助性遗传单位。 通过改造，实验室常用质粒被赋予了以下几种特性： 1. 含有多克隆位 点 区域， 可方便地插 入目的D N A片 段 。 2. 对细菌的 可转移性， 即在实验中， 可将质粒诱导入细菌。 3. 选择标记。常用的 有抗生素抗性基因。 这样， 一旦质粒进入细菌， 便可使该细菌对相应的抗生素产生抵抗能力，在含这一抗生素的琼 脂 平板上传代 。 4. 在细菌体 内可获得较高的 拷 贝数， 例如一种叫pUC的质粒， 在单一 细菌体中的拷贝数 可达500-700个。因 此， 质粒已成为分子生物学中使 用最为广泛的载体。 质攻 细颅杰色休 根据实验的需要是否将片段 进行 表达， 将栽体分为表达载体和克隆载体。 克隆载体一般是将需要目的DNA片段 与载体相连接， 导入原核细菌内，使 质粒在原核细菌内大量复制，得到大量的重组质粒。 常用的克隆载体有： pGEM-T, pBR322, pUC18/19 表达载体一般是将需要目的DNA片段 与栽体相连接