最新 PTC尝味及人类X染色体检查.docVIP

精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 实验十一 人类性别鉴定和遗传性状的检查 一、 目的： 1. 了解人类性别鉴定方法。 2. 熟悉人类间期细胞核中性染色质的形态特征和所在部位。 3. 初步掌握X染色质标本的制作方法 4． 通过对人类部分性状的调查分析，了解其遗传方式、基因频率和基因型频率。 5． 巩固和加深对所学的常见遗传病的认识。 6． 掌握常见遗传病的遗传特点及发病机理。 二、 材料、试剂： 1人类口腔黏膜上皮细胞。 2人类正常女性血涂片。 3各种浓度的PTC溶液(1/24000;1/50000;1/400000;1/75000;1/3000000)。 4改良苯酚品红染液、甲醇冰醋酸(3∶1)固定液。 三、 内容 1． X染色质标本的制作和观察。 2． 正常女性血涂片嗜中性粒细胞分叶核鼓槌的观察。 3． PTC尝味试验。 4． 人类部分遗传性状的调查。 3． 观看电教片：《遗传病》 人类性染色质及性别鉴定 人类性染色质是间期细胞中性染色体呈异染色质部分的特殊结构。人类性别鉴定方法，除通过性染色体鉴别外，另外，还可通过间期体细胞核内的X染色质、Y染色质和嗜中性粒细胞分叶核上的鼓槌进行鉴别。 (一) X染色质标本的制作和观察 1. 实验原理 人类正常女性个体在体细胞中有两条X染色体，但其中的一条X染色体在间期细胞中失去活性，形成一个卵圆形的X小体即X染色质，紧靠核膜的内缘。而正常男性只有一条X染色体，这条X染色体在间期细胞始终要保持活性，故无X染色质形成。通过检测间期细胞中X染色质既可用于性别的鉴定，也可用于临床性染色体病的诊断。 2． 人口腔黏膜上皮细胞标本制作 取清洁牙签轻刮口腔颊部内侧黏膜，将刮起物均匀涂抹在载片上(涂片时，只能从左至右或右至左，切勿来回涂抹)，范围约一张盖片大小。然后，将已制好的涂片滴甲醇冰醋酸固定液1～2滴，约15分钟，空气干燥。然后，加改良苯酚品红染液1～2滴，染色约5分钟，吸去多余染料。镜检。 图11-1正常女性口腔黏膜上皮细胞(示X染色质) 3． 观察 将已制好的玻片标本置于低倍镜(10×)下观察，找到分散良好，且无重叠的细胞，转高倍镜(40×)观察。X染色质通常紧贴于核膜内缘，形态为一结构紧密、且染色较深轮廓清晰的小体，直径约为1μm，呈圆形、三角形或卵圆形 (图11-1)。在正常女性的口腔黏膜上皮细胞中，其出现率为17％～45％。 观察时应特别注意，凡位于细胞核中间，或核中间与核膜内缘同时出现的类似X染色质的结构，均有可能是其他核质凝聚物，故不能认为是X染色质。交换观察男、女同学的X染色质的制片，并比较男性、女性的X染色质的制片观察结果。 (二) 鼓槌的观察 鼓槌为女性嗜中性粒细胞分叶核上特有的圆球形突起物，直径约为1.5μm，有一细丝柄与分叶核相连，形似鼓槌。在正常女性嗜中性粒细胞中，鼓槌的出现为1.5～6%，而正常男性无鼓槌出现。用低倍镜(10×)观察已制好的女性血涂片标本，找到嗜中性粒细胞分叶核后，换高倍镜(40×)进一步观察(图11-2)。 图11-2正常女性嗜中性粒细胞（箭头所指为鼓槌） (三) Y染色质的制作和观察 1． 实验原理 正常男性个体间期细胞中有一条Y染色体，当用荧光染料染色时，就可看到在细胞核内有一大小约0.3μm的强荧光小体，称为Y染色质或Y小体。正常男性口腔上皮细胞的Y染色质检查阳性率为80%，正常男性胎儿羊水细胞的Y染色质检查阳性率为20%～70%。故通过检测间期细胞中Y染色质也可用于性别的鉴定和临床性染色体病的诊断。 2． 制片 用消毒牙签刮取男性口腔黏膜上皮细胞，制成临时涂片标本。在涂片标本上滴加甲醇冰醋酸固定液1～2滴，固定30～50min。室温干燥后，用0.5%盐酸喹吖因染料染色5～10min,流水冲洗约3min。再用PH值6.0的磷酸缓冲液分色约5min后，滴入适量的缓冲液，加盖盖玻片，并用吸水纸吸去多余的缓冲液，再用指甲油或石蜡油将盖玻片周围封固，平放暗处约30min后，即可镜检观察。制作Y染色质标本的材料，还可用血液细胞、羊水细胞、精子细胞及发根毛囊细胞等。 3． 观察 将制作好的玻片标本用荧光显微镜观察，先在低倍镜下找到分散较好的细胞，然后转换高倍镜观察。若在细胞核近中心处见有一个发亮的小点，其直径约为0.5μm，这便是Y染色质（图11-3）。一般认为，这一发亮的荧光小点是来自Y染色体长臂异染色质荧光区。所以，在正常男性的间期细胞中可见一个Y染色质荧光点。由于口腔黏膜上皮细胞涂片内易混入细菌或其他荧光物质的干扰，故容易造成假阳性，因此要