遗传学实验课：实验六、人类外周血染色体标本制备.pptVIP

实验六、人类外周血染色体标本的制备 实验目的 学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法，利用培养后进行分裂的细胞制备人类染色体标本 了解人类染色体的基本形态特点，为核型分析和原位杂交实验提供良好的染色体标本 实验原理 外周血中的淋巴细胞几乎都处于G0期或G1期，一般情况下是不分裂的。但是加入植物血凝素时，小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，并开始进行有丝分裂。经短期培养后，用秋水仙素处理、低渗、固定、滴片和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞进行观察。 实验原理 此方法是Moorhead于1960年建立。在人类遗传分析中普遍采用外周血培养的方法获取分裂相细胞，进而开展临床和基础遗传学的研究，这对于遗传疾病的检出以及遗传咨询等工作发挥重要作用。 器具 隔水式恒温培养箱，恒温水浴箱，离心机，显微镜，刻度离心管、吸管、试管架，载玻片等。 试剂 抗凝人外周血（淋巴细胞），淋巴细胞培养液（可直接购买），秋水仙素（10μg/ml），0.075 mol/L KCL低渗液，磷酸缓冲液（pH6.8），甲醇、冰醋酸、吉姆萨（Giemsa）原液 取加入肝素抗凝的外周血 加植物血凝素PHA，37℃培养淋巴细胞72h 秋水仙素处理细胞，细胞停止分裂，停滞在细胞分裂中期 KCl进行低渗处理 离心收集细胞 离心收集细胞 固定细胞 预固定细胞 离心收集细胞 滴片，气干 离心收集细胞 操作步骤 1.用一次性注射器抽取