遗传学实验课：实验四 细胞的传代培养.pptVIP

实验四 细胞的传代培养 实验目的 了解体外细胞传代培养的方法及技术，观察体外细胞的形态及生长情况。 实验原理 一些血清蛋白和培养细胞的膜表面黏附蛋白参与了细胞与细胞之间及细胞与培养瓶的黏附，使细胞贴壁生长及互相连接成片。用胰蛋白酶分解这些蛋白可以使细胞间连接断裂，细胞与培养瓶底部分开。 实验用品和材料 材料：融合度达到80%～90%的贴壁生长细胞 试剂：DMEM基础培养液，DMEM完全培养液（DMEM基础培养液90%，小牛血清10%，青霉素100 IU/mL，链霉素 100μg/mL） 用品：生物安全柜、CO2培养箱、倒置显微镜、培养瓶。 操作步骤 1.准备工作： （1）用酒精棉球擦拭生物安全柜的操作台面 （2）将实验中所需要物品（如加样枪、枪头盒、移液管、电动移液枪、培养品等）置于生物安全柜中，开紫外线灯照射20min （3）关紫外灯，并通风5min 操作步骤 2.清洗去除培养液及死亡细胞：取出培养瓶，先吸弃原有的培养液，用5mL PBS清洗培养物2次，以尽量去除培养液中的血清成分和死亡细胞。 操作步骤 3.酶消化：加入2ml含0.02% EDTA的0.25%胰蛋白酶溶液，置于37度培养箱中孵育0.5～1 min左右，取出并于倒置显微镜下监测消化情况，待细胞突起缩回、细胞之间间隙增大、细胞近乎缩成圆球形时即可。 注意细胞不要消化过度 操作步骤 4.终