遗传学实验课：实验二、涂片染色法观察骨髓自然凋亡细胞.pptVIP

实验二、涂片染色法观察骨髓自然凋亡细胞 实验目的 掌握骨髓涂片的制作与染色 掌握油镜的使用方法 了解细胞凋亡的形态学特征 了解凋亡的常用检测方法 实验原理 凋亡细胞的形态学变化主要体现在细胞核，首先出现染色质凝集于中央异染色质区域或核膜下，形成浓缩的染色质块，嗜碱性染色增强；随着染色质不断凝聚，核膜在核孔处断裂形成碎片，散布于细胞中；最后细胞核裂解为碎块，核碎片和部分细胞质由膜包被形成凋亡小体，从细胞表面出芽脱落。 核的这些变化用普通染核染料或能与DNA结合的荧光染料都可以显示出来。 实验原理 Giemsa染色：一般用于血液和造血组织来源的细胞或白血病细胞的染色。 Giemsa染色液由美蓝，伊红组成。伊红为酸性染料，可以与碱性蛋白质结合，呈粉红色；美蓝为碱性染料，可以与酸性物质，如细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆结合，呈紫蓝色；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，呈淡紫色。 油镜的使用 油镜的放大倍数较高，而透镜很小，光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜）时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观察不清。如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰 。 实验材料及器具 小白鼠 0.9%生理盐水、甲醇、PBS、Giemsa染液 光学显微镜、离心机、剪刀、注射器及针头、离