遗传学实验课：实验五 细胞的复苏.pptVIP

实验五 细胞的传代、复苏与冻存实验 实验目的 了解和掌握细胞传代培养的方法及技术，观察体外细胞的形态及生长情况。 了解和掌握细胞冻存与复苏的原理和方法，能独立完成操作。 细胞穿代实验原理 一些血清蛋白和培养细胞的膜表面黏附蛋白参与了细胞与细胞之间及细胞与培养瓶的黏附，使细胞贴壁生长及互相连接成片。用胰蛋白酶分解这些蛋白可以使细胞间连接断裂，细胞与培养瓶底部分开。 细胞冻存与复苏实验原理 在低于-70℃的超低温条件下，细胞内部的生化反应极为缓慢，甚至终止。因此，采取适当的方法将生物材料温度降至超低温条件，即可使生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡。 当以适当的方法将冻存的生物体恢复至常温时，其内部的生化反应又可恢复正常。 细胞冻存与复苏实验原理 细胞冻存与复苏的原则是“慢冻快融”，这样可以使细胞较好的存活。温度由-1℃、-25℃、-80℃之后放入液氮内（-196℃）。 冻存时为了减少冰晶对细胞的损伤，常常加入5%～15%的甘油或二甲亚砜（DMSO）。这两种物质在低温下对细胞没有明显毒性，而且分子小，溶解度大，易于穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性；加上缓慢冷冻方法可使细胞内的水分渗透到细胞外，在细胞外形成冰晶，减少细胞内冰晶的形成，从而减少形成冰晶所造成的细胞损伤。 复苏时把装有细胞的冻存管直接放入37℃水浴中迅速解冻，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，避免缓慢