核酸电泳相关试剂 缓冲液的配制方法.docxVIP

核酸电泳相关试剂 缓冲液的配制方法 核酸电泳相关试剂period;缓冲液的配制方法 核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4. 加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3. 使用2 N NaOH调节pH 值至7.0。 4. 再向溶液中加入下列试剂。 5. 用DEPC 处理水将溶液定容至1 L。 6. 用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7. 室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭 (10 mg/ml) 组份浓度 10 mg/ml溴乙锭 配制量 100 ml 配制方法 1. 称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数h 完全溶解溴乙锭。 3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4. 溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。 注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose 凝胶 配制方法 1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE 或1×TAE) 。 2. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3. 加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量) 。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4. 在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂 糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波 炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5. 使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 μg/ml)。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度 一般在 3~5 min之间。 7. 在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一 般可保存2~5天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA 的最佳分辨范围 6 × Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度 配制量 500 ml 配制方法 1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。 2. 向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。 3. 加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH 值至7.0。 4. 用去离子水定容至500 ml后，室温保存。 10 × Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度 配制置 10 ml 配制方法 1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。 2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC 处理水后，充分搅拌溶解。 3. 加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混匀。 4. 用DEPC 处理水定容至10 ml后，室温保存。 核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法 组份浓度 3.0 M NaCl，0.3 M Na3citrate·2H2O(柠檬酸钠) 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。