《分子生物学》第3章DNA复制.ppt

（四）引发体 DnaB利用其解旋酶活性继续扩大解链区，每个DnaB激活一个DnaG引发酶，在两个复制叉上分别开始进行前导链和后滞链上RNA引物的合成，并开始DNA的复制。 复制起始小结 功能 DnaA 识别复制起点、解链 HU 使复制起点弯曲 ATP 提供能量 DnaB 解旋酶 DnaC 装载蛋白 DnaG 引发酶（合成RNA引物） 二、延伸 （一）消除超螺旋 拓扑异构酶II——DNA旋转酶借助水解ATP产生的能量，消除DnaB解旋过程中产生的拓扑张力。 很多单链结合蛋白（SSB）结合到被解开的单链上，保护和稳定分开的单链。 （二）防止DNA复性 （三）合成DNA DNA聚合酶III 作为复制过程中最重要的酶（进行性最强），DNA聚合酶III包含10个亚基 。 第三章 DNA复制 本章重点 1.DNA复制的原则。 2.DNA复制相关的酶。 3.原核生物DNA复制的过程。 本章难点 1.端粒合成的过程。 第三章 DNA复制 第一节 复制的原则 第二节 复制的方式 第三节 原核生物的复制 第四节 真核生物的复制 第一节 复制的原则 一、半保留复制 （一）内容 复制时，DNA两条链解开，以每条链为模板，形成的两个子代DNA分子中有一条链来自亲本，一条链为新合成的。 一、半保留复制 （二）证实 一、半保留复制 （二）证实 第一代 第二代 （一）内容 一条链的合成按5′ →3′ 方向连续合成，其合成方向与复制叉的移动方向一致，称为前导链，另一条链先合成许多不连续的小片段（冈崎片段），最后连接成一条完整的DNA链，称为后滞链。 二、半不连续复制 后滞链模版回折解决不同向的问题！ 冈崎片段 冈崎片段，是在DNA的后随链的不连续合成期间生成的片段相对比较短的DNA链（大约1000核苷酸残基）。这是冈崎令治与冈崎恒子夫妇在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的。 （一）内容 所有已知的DNA聚合酶都不能发动新链的合成，只能催化已有链的延长反应。 引物是RNA，由RNA聚合酶合成。 三、复制需要引物 （二）证实 三、复制需要引物 四、复制通常双向进行 （一）内容 复制时两个复制叉从复制起点开始，同时向两个方向推进。 复制从特定位点开始，开始时复制起始点呈现一个Y 形，称之为复制叉。 （二）证实 四、复制通常双向进行 低密度放射性培养基 高密度放射性培养基 第二节 DNA复制的方式 DNA 复制要从DNA 分子的特定部位开始，此特定部位称为复制起始点, Ori 表示。 复制起点富含AT序列。 第二节 DNA复制的方式 在原核生物中复制起始点常位于染色体的一个特定部位，即只有一个起始点。（单起点） 真核生物的染色体是在多个特定部位上同时进行DNA 复制的，有几个复制起始点。（多起点） 多起点复制 一、θ型复制 二、D环复制 三、滚环复制 第三节 原核生物的复制 一、起始 二、延伸 三、终止 一、复制起始 复制起始的过程 大肠杆菌的复制起点为ori C，由245 bp组成。 有两组连续排列的短的重复片段：一个是3个13bp序列，另一个是4个9bp序列。 一、复制起始 1.2~4个DnaA蛋白各带1个ATP结合在4个9bp重复序列上。 （一）起始复合物的形成 2.HU蛋白与DNA结合，促使双链DNA弯曲，使DnaA蛋白作用于邻近3个富含AT的13bp序列。 （一）起始复合物的形成 在ATP存在的条件下，3个13bp序列被解链，形成开放复合物。 （二）开放复合物的形成 （三）预引发体的形成 DNaA招募DnaB-DnaC复合体结合到解链区，形成预引发体。