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南医生化实验报告2 南医生化实验报告2 生物化学实验报告 1. 学习并掌握碱裂解法提取质粒DNA 的原理、各试剂的作用及具体操作步骤； 2. 学习并掌握PCR 基因扩增的原理及具体操作步骤； 3. 学习并掌握紫外吸收法检测DNA 浓度与纯度的原理及方法； 4. 学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的操作方法。 1. 质粒DNA 的提取——碱裂解法 在细菌细胞中，染色体DNA 以双螺旋结构存在，质粒DNA 以共价闭合环状形式存在。细胞破碎后，染色体DNA 和质粒DNA 均被释放出来，但两者变性与复性所依赖的溶液pH 值不同。在pH 高达12.6的碱性条件下，细菌的线性染色体DNA 氢键断裂。其中，双螺旋结构解开而变性；而质粒中超螺旋结构共价闭合环状的两条互补链不会完全分离。当以pH4.8的高盐缓冲液调节其pH 值至中性时，变性的质粒DNA 复性并保存在溶液中，线状染色体DNA 不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心与变性蛋白质与细胞碎片缠绕在一起形成沉淀；而质粒DNA 双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，溶于上 2.PCR 基因扩增 PCR （Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA 序列。是指在DNA 聚合酶催化下，以DNA 为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸