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甘肃棘豆化学成分研究 甘肃棘豆化学成分研究 中兽医医药杂志　J TCV M 2021年第5期ξλ 甘肃棘豆化学成分研究 Ⅰ. 碱水氯仿提取部位成分分析 童德文, 赵宝玉, 廉士刚, 樊泽峰 (西北农林科技大学动物科技学院, 陕西杨凌712100) 摘　要:　将甘肃棘豆草粉用甲醇浸提, 浓缩浸提液后,1mol/l 的盐酸酸解, 抽滤, 所得酸水液首先用氯仿萃取8次后, 然后用NaOH 碱化, 最后碱水液经氯仿萃取4次后所得氯仿液减压浓缩即得碱水氯仿提取部位。取碱水氯仿提取部位2216g , 在氯仿-乙酸乙酯-甲醇洗脱体系下, 柱层析梯度洗脱进行分离, 每30ml 收集1份, 共收集721份, TLC 检测, 合并同类, 得晶体Ⅰ, 对晶体Ⅰ进行了分光光度和TLC 鉴定。对碱水氯仿提取部位进行气质联用分析, 共有20种成分, 确定了结构的成分有10种, 分别是生物碱1种、酯6种、醇1种、芳香烃1种、脂肪酸1种, 其它10种成分的结构还待进一步分析确定。　　关键词:　甘肃棘豆; TLC ; 柱层析 中图分类号:S85918　　　　　文献标识码:A 　　文章编号:1000-6354(2021) 05-0013-04　　甘肃棘豆(Oxyt ropis kansuensis Bunge. ) 为多年生豆科棘2　试验方法 豆属草本植物, 是疯草(locoweed ) 的一种, 广泛分布于宁夏、2. 1 甘肃棘豆中碱水氯仿部位的提取 内蒙古、甘肃东部和南部、四川西部、云南西北部及青海西部和南部, 马、牛、羊采食后引起以神经症状为主的慢性中毒, (Locodisease ) , 给畜牧业生产造成巨大损失, 是目前我国西部牧区危害最严重的毒草之一1～4。我国对疯草中毒的研究始于70年代末期, 经过多年的研究, 国内学者认为疯草中毒的主要毒性成分为生物碱, 目前在疯草中已分离鉴定出的生物碱主要有吲哚兹啶类生物碱、喹喏里西啶类生物碱和哌啶类生物碱5～9。本试验在醇类提取法分离苦马豆素的基础上, 试图通过柱层析分离甘肃棘豆碱性氯仿提取部位中的各组分, 并利用气质联用对其中的各组分进行分析, 以期达到对该部位化学成分系统分析的目的, 为进一步防治动物疯草中毒奠定基础。 1　试验材料1. 1　植物材料 甘肃棘豆,2002年8月采于青海泽库县, 自然干燥, 粉碎备用。 1. 2　主要仪器和试剂 循环式多用真空泵(郑州长城工贸有限公司生产) 、旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂生产) 、可调式电热板(北京化玻联医疗器械有限公司生产) 、ZF -2型三用紫光仪(上海安亭电子仪器厂生产) 、HPG 6890/MS973联用仪(美国惠普公司) 、玻璃管层析柱(415cm ×70cm ) 、薄层层析硅胶(批号: 990903, 青岛海洋化工集团公司) 、柱层析硅胶(批号:图1　甘肃棘豆中碱水氯仿部位的提取流程 2001830, 青岛市北区海化干燥剂厂) 。 2. 2　碱水氯仿提取部位的处理 收稿日期:2021-04-30 将碱水氯仿提取部分置水浴锅上, 完全干燥后与60～ 项目来源:国家自然科学基金资助项目 ; 西北农 100目的硅胶按1∶1(g/g ) 进行拌样, 将拌好的样品挥干, 研细 林科技大学重点科研项目资助(080807) 作者简介:童德文(1967-) , 男, 博士, 副教授, 主要从事兽医 2. 3　薄层层析(Thin -layer Chromatography , TLC ) 病理学与毒理学教学与研究。 将甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙醚、苯、石油醚、二氯甲烷等8种有机溶剂进行组合搭配作为展开剂, 进行氯仿碱水 提取部位的TLC 试验, 根据展开效果选择柱层析理想的洗脱体系。 2. 4　碱水氯仿提取部位的柱层析分离 取处理好的样品3516g , 置硅胶柱。洗脱液用氯仿-乙酸乙酯-甲醇系统梯度洗脱, 梯度顺序为氯仿→氯仿∶乙酸乙酯(501∶、201∶、11∶, v/v ) →乙酸乙酯→氯仿∶甲醇∶水∶氨水(76∶20∶2∶2, v/v ) →甲醇。每30ml 收集1份, 共收集721份。2. 5　碱水氯仿提取部位柱层析后组分的TLC 检测 展开剂(v /v ) ∶氯仿∶乙醚为7∶1或4∶1; 氯仿∶甲醇为 7∶1或4∶1; 氯仿∶甲醇∶氨水为15∶4∶1; 氯仿∶甲醇∶氨水∶水为70∶26∶2∶2。 显色剂:改良碘化铋钾溶液; 5%硫酸乙醇溶液; 过氧